| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| ·PACAP及其受体的简介 | 第11-17页 |
| ·PACAP及其受体研究概况 | 第11-14页 |
| ·PACAP的生物学功能 | 第14-17页 |
| ·VPAC1受体 | 第17-18页 |
| ·VPAC1受体特异激动剂 | 第18-19页 |
| ·内含肽介导多肽制备的原理及优点 | 第19-24页 |
| ·蛋白内含肽简介 | 第19-21页 |
| ·蛋白内含肽介导蛋白纯化 | 第21页 |
| ·IMPACT-TWIN蛋白表达纯化系统简介 | 第21-24页 |
| ·本研究意义、目的及主要研究内容 | 第24-26页 |
| ·研究目的及意义 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-39页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·材料 | 第27-32页 |
| ·实验动物、细胞株及质粒 | 第27页 |
| ·工具酶、试剂盒及抗体 | 第27-28页 |
| ·常用试剂 | 第28页 |
| ·实验主要试剂配方 | 第28-32页 |
| ·实验方法技术 | 第32-39页 |
| ·基因工程技术 | 第32-34页 |
| ·蛋白纯化及检测技术 | 第34-36页 |
| ·细胞培养技术 | 第36-37页 |
| ·细胞染色技术 | 第37-39页 |
| 第三章 VPAC1特异激动剂的能量平衡作用的研究 | 第39-52页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·抑制肥胖实验结果 | 第41-45页 |
| ·肥胖小鼠减肥实验结果 | 第45-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·抑制肥胖实验的讨论 | 第50-51页 |
| ·减肥实验的讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 VPAC1特异激动剂对能量代谢作用的机理初探 | 第52-59页 |
| ·实验方法 | 第52-53页 |
| ·VPAC1受体在脂肪细胞的表达检测 | 第52页 |
| ·促进脂肪细胞分化实验 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-57页 |
| ·VPAC1受体表达的检测结果 | 第53-56页 |
| ·VPAC1特异激动剂对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响 | 第56页 |
| ·降脂实验结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| ·VPAC1受体表达检测讨论 | 第57页 |
| ·VPAC1特异激动剂对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响讨论 | 第57-58页 |
| ·降脂实验讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 VPAC1特异激动剂的高效制备 | 第59-66页 |
| ·工程菌pTWIN-VPAC1-ER2566的构建 | 第59-61页 |
| ·VPAC1特异激动剂基因的构建及纯化方案的选择 | 第59-61页 |
| ·重组表达载体pTWIN-VPAC1的构建 | 第61页 |
| ·工程菌构建 | 第61页 |
| ·工程菌pTWIN-VPAC1-ER2566的扩大培养 | 第61-62页 |
| ·内含肽介导的目的多肽的纯化 | 第62页 |
| ·结果 | 第62-65页 |
| ·重组表达载体pTWIN-VPAC1的鉴定 | 第62-63页 |
| ·工程菌pTWIN-VPAC1-ER2566的检测 | 第63页 |
| ·目的多肽纯化结果 | 第63-64页 |
| ·目的多肽的初步鉴定结果 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-66页 |
| 第六章 同源模建VPAC1受体和VPAC1特异激动剂 | 第66-70页 |
| ·实验方法 | 第66页 |
| ·实验结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·VPAC1特异激动剂二级结构模拟图与三级结构模拟图 | 第66-68页 |
| ·VPAC1受体胞外段N端1—144氨基酸三级结构模拟图 | 第68页 |
| ·VPAC1特异激动剂结合区模拟图 | 第68-70页 |
| 第七章 总结与展望 | 第70-72页 |
| ·总结 | 第70-71页 |
| ·展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-82页 |
| 附录1 pTWIN-VPAC1测序结果 | 第78-79页 |
| 附录2 目的多肽的飞行质谱图 | 第79-80页 |
| 附录3 VPAC1特异激动剂标准品的飞行质谱图 | 第80-81页 |
| 附录4 Comparison Between Intein-Tag Fusions | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
