| 摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·生肌调节因子家族 | 第13-15页 |
| ·MyoD基因家族的结构特点与功能 | 第13-14页 |
| ·MyoD基因结构与功能 | 第14-15页 |
| ·Myostatin基因的结构与功能 | 第15-17页 |
| ·RNAi | 第17-22页 |
| ·RNAi现象的发现 | 第17页 |
| ·RNAi的一般机制 | 第17-18页 |
| ·在哺乳动物中应用RNAi技术的主要策略 | 第18-21页 |
| ·RNAi技术的应用前景 | 第21-22页 |
| ·骨骼肌卫星细胞 | 第22-23页 |
| ·肌卫星细胞的起源 | 第22页 |
| ·肌卫星细胞激活与成肌分化的调控因子 | 第22页 |
| ·骨骼肌卫星细胞培养 | 第22-23页 |
| ·研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·主要器材 | 第24页 |
| ·主要药品及配制 | 第24-26页 |
| ·主要分析软件 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·细胞体外培养体系的建立 | 第26-28页 |
| ·MyoD与Myostatin基因在猪骨骼肌卫星细胞体外培养不同世代的表达规律 | 第28-30页 |
| ·MyoD基因干扰序列的设计 | 第30-31页 |
| ·MyoD基因干扰载体的构建与鉴定 | 第31-35页 |
| ·MyoD与myostatin基因最佳干扰体系的筛选与确定 | 第35-36页 |
| ·干扰MyoD与myostatin基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第36页 |
| ·分别干扰MyoD、Myostatin后猪骨骼肌卫星细胞Myostatin、MyoD表达规律变化的研究 | 第36-37页 |
| 3 结果分析 | 第37-58页 |
| ·骨骼肌卫星细胞体系的建立 | 第37-41页 |
| ·细胞分离、培养 | 第37-38页 |
| ·细胞形态学观察 | 第38-39页 |
| ·冻存与复苏 | 第39-40页 |
| ·细胞生长曲线 | 第40页 |
| ·核型分析 | 第40-41页 |
| ·MyoD与Myostatin在不同世代表达规律 | 第41-43页 |
| ·RNA的提取 | 第41页 |
| ·MyoD在细胞不同世代表达规律的研究 | 第41-42页 |
| ·Myostatin在不同世代的表达规律 | 第42-43页 |
| ·MyoD基因干扰序列的设计结果 | 第43-44页 |
| ·MyoD基因干扰序列载体鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组质粒测序 | 第44-45页 |
| ·酶切电泳检测 | 第45-46页 |
| ·MyoD与Myostatin基因最佳干扰体系的筛选与确定 | 第46-53页 |
| ·用于筛选转染细胞的G-418最佳浓度的选择与确定 | 第46页 |
| ·MyoD最佳干扰序列与最佳干扰时间的筛选与确定 | 第46-50页 |
| ·Myostatin最佳干扰序列与最佳干扰时间的筛选与确定 | 第50-53页 |
| ·干扰MyoD与myostatin基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第53-55页 |
| ·干扰MyoD基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| ·干扰Myostatin基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第54-55页 |
| ·分别干扰MyoD、Myostatin后猪骨骼肌卫星细胞Myostatin、MyoD表达规律变化的研究 | 第55-57页 |
| ·干扰MyoD后骨骼肌卫星细胞Myostatin表达规律的研究 | 第55-56页 |
| ·干扰Myostatin后MyoD表达规律的研究 | 第56-57页 |
| ·干扰MyoD、myostatin基因后猪骨骼肌卫星细胞增殖与二基因表达相关性 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| ·细胞培养的体系和方法 | 第58页 |
| ·G418筛选浓度的选择 | 第58-59页 |
| ·关于RT-PCR法进行基因表达水平检测的影响因素 | 第59-60页 |
| ·各种因素对MyoD基因RNAi效果的影响 | 第60-61页 |
| ·设计的序列对RNA干扰效果的影响 | 第60-61页 |
| ·干扰时间对RNAi效果的影响 | 第61页 |
| ·分别干扰MyoD、Myostatin后猪骨骼肌卫星细胞Myostatin、MyoD表达规律变化的研究 | 第61-62页 |
| ·干扰MyoD与Myostatin基因对猪骨骼肌卫星细胞增殖的影响 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
