| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-37页 |
| 第一节 线粒体VDAC与细胞凋亡 | 第15-27页 |
| ·VDAC 的结构及其生理功能 | 第15-17页 |
| ·VDAC 的结构 | 第15-16页 |
| ·VDAC 的生理功能 | 第16-17页 |
| ·VDAC 活性的调节 | 第17-22页 |
| ·VDAC 与胞质、线粒体蛋白的相互作用 | 第17-18页 |
| ·VDAC 与己糖激酶(HK)的相互作用 | 第18-19页 |
| ·VDAC 与活性氧类（ROS） | 第19-20页 |
| ·VDAC 与细胞内Ca~(2+)信号 | 第20-21页 |
| ·其它方式的调节 | 第21-22页 |
| ·VDAC 与细胞凋亡 | 第22-27页 |
| ·VDAC 与 Bcl-2 促凋亡蛋白的相互作用 | 第22-23页 |
| ·VDAC 关闭诱导细胞凋亡 | 第23-25页 |
| ·VDAC异构体与细胞凋亡 | 第25页 |
| ·VDAC 参与 PTP 介导的细胞凋亡 | 第25-27页 |
| 第二节 鱼类免疫球蛋白 | 第27-36页 |
| ·鱼类IgM | 第27-31页 |
| ·鱼类IgM 基因的克隆 | 第27页 |
| ·血清中IgM | 第27-29页 |
| ·粘液中IgM | 第29-30页 |
| ·鱼类血清IgM 与粘液IgM 的关系 | 第30-31页 |
| ·鱼类 IgD | 第31-33页 |
| ·鱼类 IgW | 第33-34页 |
| ·鱼类IgNAR | 第34-35页 |
| ·鱼类IgT 和IgZ | 第35页 |
| ·鱼类 IgG | 第35-36页 |
| 第三节 本研究的背景及目的意义 | 第36-37页 |
| 第二章 牙鲆两个抗病毒相关基因的克隆鉴定及表达分析 | 第37-86页 |
| 第一节 牙鲆VDAC基因(PoVDAC)的克隆鉴定及表达分析 | 第37-70页 |
| ·前言 | 第37页 |
| ·材料和方法 | 第37-46页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第37-38页 |
| ·RACE-PCR 扩增PoVDAC 基因全长cDNA 序列 | 第38页 |
| ·序列同源性、二级结构及分子进化树分析 | 第38-39页 |
| ·Real-time PCR 反应 | 第39-40页 |
| ·细胞和组织总 RNA 的分离及第一链cDNA 合成 | 第39页 |
| ·Real-time PCR | 第39-40页 |
| ·PoVDAC在FEC细胞中的诱导表达分析 | 第40页 |
| ·灭活 SMRV 诱导 FEC 细胞的处理 | 第40页 |
| ·PoVDAC蛋白表达的流式细胞术(FCM)分析 | 第40页 |
| ·组织特异性表达分析 | 第40-41页 |
| ·PoVDAC 基因原核表达载体的构建及其在细菌中的诱导表达 | 第41页 |
| ·重组原核表达载体的构建及鉴定 | 第41页 |
| ·PoVDAC 蛋白的表达及鉴定 | 第41页 |
| ·PoVDAC 蛋白抗血清的制备 | 第41-42页 |
| ·多克隆兔抗的制备 | 第42页 |
| ·多克隆鱼抗的制备 | 第42页 |
| ·Western blot 分析 | 第42-43页 |
| ·细胞或组织蛋白样品制备 | 第42页 |
| ·Western blot 分析 | 第42-43页 |
| ·PoVDAC基因真核表达载体的构建以及在鱼类细胞中瞬时表达 | 第43-44页 |
| ·重组真核表达载体的构建及鉴定 | 第43页 |
| ·PoVDAC/pEGFP-N3 质粒的提取 | 第43-44页 |
| ·PoVDAC/pEGFP-N3 在鱼类细胞系中的瞬时转染 | 第44页 |
| ·真核表达载体PoVDAC/pcDNA3构建及在EPC细胞的表达分析 | 第44页 |
| ·VDAC 蛋白在细胞内分布的免疫荧光检测 | 第44-45页 |
| ·细胞免疫组化双标记实验 | 第45-46页 |
| ·病毒诱导 FEC 细胞凋亡的流式细胞术(FCM)分析 | 第46页 |
| ·病毒诱导的牙鲆皮肤培养液中特异性抗体的检测 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-68页 |
| ·牙鲆PoVDAC基因全长cDNA 的克隆及特征 | 第46-48页 |
| ·同源性和分子进化树分析 | 第48-51页 |
| ·PoVDAC 基因在SMRV 病毒诱导下的差异表达 | 第51页 |
| ·PoVDAC基因原核表达和多克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第51页 |
| ·原核表达和多克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| ·PoVDAC基因组织表达特异性分析 | 第52-55页 |
| ·PoVDAC基因在鱼类细胞中的瞬时表达及其亚细胞定位 | 第55-58页 |
| ·VDAC在鱼类细胞中的亚细胞分布 | 第58-59页 |
| ·PoVDAC及SMRV在病毒诱导FEC细胞中定位分析 | 第59-62页 |
| ·流式细胞术对SMRV 诱导的FEC凋亡细胞的定量分析 | 第62页 |
| ·病毒诱导的牙鲆皮肤培养液中特异性抗体水平 | 第62-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第二节 牙鲆钙调素基因(PoCaM)的克隆及在原核和真核细胞中的表达 | 第70-86页 |
| ·前言 | 第70页 |
| ·材料和方法 | 第70-73页 |
| ·试剂 | 第70-71页 |
| ·EST来源 | 第71页 |
| ·计算机辅助分析 | 第71页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第71-72页 |
| ·原核表达载体的构建及诱导表达 | 第72页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第72页 |
| ·PoCaM蛋白的诱导表达 | 第72页 |
| ·真核表达载体的构建及瞬时表达 | 第72-73页 |
| ·真核表达载体的构建及鉴定 | 第72页 |
| ·PoCaM在鱼类细胞系中的瞬时表达 | 第72-73页 |
| ·PoCaM 在EPC 细胞系中的稳定转染 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-82页 |
| ·PoCaM基因及编码产物特征分析 | 第73页 |
| ·目的基因PCR扩增结果 | 第73-77页 |
| ·PoCaM 基因在大肠杆菌中的融合表达 | 第77-79页 |
| ·原核表达载体的构建及鉴定 | 第77-78页 |
| ·PoCaM 基因在大肠杆菌中的融合表达 | 第78-79页 |
| ·PoCaM 基因在鱼类细胞系中的表达 | 第79-82页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第79-80页 |
| ·PoCaM在鱼类细胞系中的瞬时表达 | 第80-81页 |
| ·PoCaM在 EPC 细胞系中的稳定表达 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-86页 |
| 第三章 病毒诱导的草鱼皮肤培养上清液中特异性抗体分析 | 第86-102页 |
| ·前言 | 第86-87页 |
| ·材料与方法 | 第87-91页 |
| ·实验鱼 | 第87页 |
| ·免疫接种 | 第87-88页 |
| ·皮肤培养上清液的收集 | 第88页 |
| ·间接酶联免疫吸附试验(iELISA) | 第88-89页 |
| ·Western blot分析 | 第89-90页 |
| ·抗血清及皮肤培养液抗体特异性分析 | 第89页 |
| ·草鱼抗血清中IgM 分析 | 第89-90页 |
| ·类 Ig 样物质的分析 | 第90页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第90页 |
| ·流式细胞术(FCM)分析 | 第90-91页 |
| ·结果 | 第91-99页 |
| ·草鱼抗SMRV病毒抗体的检测结果 | 第91-94页 |
| ·抗血清及皮肤培养液iELISA效价 | 第91页 |
| ·抗血清及皮肤培养液的western blot分析 | 第91-92页 |
| ·抗血清、粘液及皮肤培养液特性分析 | 第92-93页 |
| ·抗血清及皮肤培养液的IFA检测结果 | 第93-94页 |
| ·皮肤培养液的FCM分析 | 第94页 |
| ·草鱼抗 RGV 病毒抗体的检测结果 | 第94-99页 |
| ·抗血清的western blot分析 | 第94-96页 |
| ·皮肤培养液中抗 RGV 病毒抗体水平 | 第96-97页 |
| ·抗血清及皮肤培养液的 IFA 检测结果 | 第97-99页 |
| ·草鱼皮肤培养液中抗 VDAC 融合蛋白抗体水平 | 第99页 |
| ·讨论 | 第99-102页 |
| 第四章 赤点石斑鱼皮肤培养上清液抗病毒活性的初步研究 | 第102-117页 |
| 第一节 赤点石斑鱼皮肤培养上清液抗病毒活性的初步研究 | 第102-113页 |
| ·前言 | 第102页 |
| ·材料和方法 | 第102-104页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·皮肤的取样 | 第102-103页 |
| ·皮肤的培养 | 第103页 |
| ·皮肤培养上清液的收集及灭活处理 | 第103页 |
| ·细胞形态观察及计数 | 第103页 |
| ·皮肤培养上清液抗病毒活性检测 | 第103-104页 |
| ·结果 | 第104-111页 |
| ·石斑鱼皮肤的体外培养 | 第104页 |
| ·皮肤培养上清液抗病毒活性 | 第104-111页 |
| ·抗 RGV 病毒结果 | 第104-105页 |
| ·抗 SMRV 病毒结果 | 第105-111页 |
| ·讨论 | 第111-113页 |
| 第二节 赤点石斑鱼血清与皮肤粘液的SDS-PAGE 蛋白电泳分析 | 第113-117页 |
| ·前言 | 第113页 |
| ·材料和方法 | 第113-114页 |
| ·实验材料 | 第113页 |
| ·血清及皮肤粘液样品制备 | 第113页 |
| ·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第113-114页 |
| ·结果 | 第114-116页 |
| ·讨论 | 第116-117页 |
| 总结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 附录 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第135页 |
