| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-47页 |
| 文献综述Ⅰ 昆虫神经系统靶点基因概述 | 第11-29页 |
| 1. 引言 | 第11-13页 |
| 2 中枢神经系统靶点基因概述 | 第13-20页 |
| ·化学突触处靶点基因概述 | 第13-17页 |
| ·乙酰胆碱酯酶靶标基因研究概况 | 第13-15页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的生理生化特性 | 第14-15页 |
| ·果蝇乙酰胆碱酯酶蛋白质结构 | 第15页 |
| ·乙酰胆碱受体靶标基因研究概况 | 第15-17页 |
| ·乙酰胆碱受体的生理生化特性 | 第16-17页 |
| ·乙酰胆碱受体的分子生物学特征 | 第17页 |
| ·电突触部位杀虫剂靶点概述 | 第17-20页 |
| ·钠离子通道----DDT 和拟除虫菊酯类杀虫剂作用靶标 | 第17-19页 |
| ·钠离子通道的生理生化特性 | 第17-18页 |
| ·钠离子通道的分子生物学特点 | 第18-19页 |
| ·GABA 配体门控氯离子通道--环戊二烯、吡唑类杀虫剂作用靶标 | 第19-20页 |
| ·氯离子通道结构特征 | 第19-20页 |
| ·氯离子通道分子生物学特征 | 第20页 |
| 3. 激素调控系统靶点基因研究概述 | 第20-24页 |
| ·保幼激素受体----保幼激素、哒嗪酮类似物作用靶标 | 第21页 |
| ·蜕皮激素受体----酰基肼类、印楝素作用靶标 | 第21-24页 |
| ·蜕皮激素受体基因结构研究进展 | 第22页 |
| ·蜕皮激素与EcR 的作用方式 | 第22-23页 |
| ·蜕皮激素受体（EcR）结构特征 | 第23-24页 |
| 4. 总结与展望 | 第24-29页 |
| 文献综述Ⅱ 神经靶点抗性机理研究进展 | 第29-47页 |
| 1. 引言 | 第29-30页 |
| 2. 昆虫抗药性产生普遍机理概述 | 第30-31页 |
| ·表皮穿透性降低 | 第30页 |
| ·对杀虫剂解毒作用的增强 | 第30页 |
| ·靶标抗性 | 第30-31页 |
| 3. 乙酰胆碱酯酶靶点抗性机理 | 第31-35页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因靶标突变位点及相关抗性 | 第31-33页 |
| ·两种乙酰胆碱酯酶基因（ace-1，ace-2）的发现及与抗性的关系 | 第33-34页 |
| ·乙酰胆碱酯酶非靶标抗性机理的假说 | 第34-35页 |
| 4. 钠离子通道基因突变与击倒抗性的分子机理 | 第35-39页 |
| ·击倒抗性的分子机理假说 | 第36-37页 |
| ·钠通道靶标抗性相关的主要突变 | 第37-39页 |
| ·L1014F 的突变 | 第37页 |
| ·M918T 的突变 | 第37-38页 |
| ·T929I 突变 | 第38-39页 |
| ·E435K 和C785R 突变 | 第39页 |
| 5.G ABA 门控氯离子通道抗性机理 | 第39-40页 |
| 6. 抗性治理应对策略 | 第40-41页 |
| 7. 总结与展望 | 第41-47页 |
| 第二章 家蚕神经靶点基因克隆和序列分析 | 第47-85页 |
| 第一节 家蚕神经靶点基因克隆 | 第47-65页 |
| 1. 引言 | 第47-49页 |
| 2. 材料与方法 | 第49-54页 |
| ·实验材料及主要试剂 | 第49页 |
| ·家蚕和菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·家蚕脑组织RNA 提取 | 第49页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第49页 |
| ·RACE 方法获得5’端和3’端全长序列 | 第49-50页 |
| ·家蚕基因组序列分析与引物设计 | 第50-53页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因全长克隆中用到的引物 | 第50-51页 |
| ·乙酰胆碱受体α亚基基因全长克隆中用到的引物 | 第51-52页 |
| ·GABA 门控氯通道α亚基基因全长克隆中用到的引物 | 第52-53页 |
| ·PCR 扩增体系和条件 | 第53-54页 |
| ·常规PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·RACE PCR 扩增 | 第54页 |
| ·PCR 产物克隆与测序 | 第54页 |
| 3. 结果与分析 | 第54-58页 |
| ·家蚕乙酰胆碱酯酶基因全长克隆 | 第54-55页 |
| ·家蚕乙酰胆碱受体α亚基基因全长克隆 | 第55-56页 |
| ·家蚕GABA 配体门控氯离子通道α亚基基因全长克隆 | 第56-57页 |
| ·家蚕para 型钠通道cDNA 片段扩增 | 第57-58页 |
| 4. 讨论 | 第58-65页 |
| 第二节 两型乙酰胆碱脂酶序列比对与进化关系分析 | 第65-76页 |
| 1. 引言 | 第65-66页 |
| 2. 材料和方法 | 第66-69页 |
| ·乙酰胆碱酯酶蛋白序列 | 第66-67页 |
| ·乙酰胆碱酯酶分子树的构建和系统分析 | 第67-68页 |
| ·家蚕和野蚕中两型乙酰胆碱酯酶蛋白同源性分析 | 第68-69页 |
| 3. 结果与讨论 | 第69-76页 |
| ·不同物种来源AChE1 和AChE2 蛋白序列同源分析 | 第69-72页 |
| ·不同物种来源AChE1 和AChE2 蛋白聚类及系统树分析 | 第72页 |
| ·家蚕和野蚕中AChE1 和AChE2 蛋白同源比对分析及命名讨论 | 第72-76页 |
| 第三节 受体及离子通道蛋白序列分析 | 第76-85页 |
| 1. 引言 | 第76-77页 |
| 2. 材料与方法 | 第77-78页 |
| ·乙酰胆碱受体蛋白同源比对序列 | 第77页 |
| ·GABA 受体蛋白同源比对序列 | 第77-78页 |
| ·钠离子通道蛋白同源比对序列 | 第78页 |
| 3. 结果分析与讨论 | 第78-85页 |
| ·乙酰胆碱受体α亚基蛋白结构分析 | 第78-80页 |
| ·GABA 受体α亚基蛋白结构分析 | 第80-82页 |
| ·钠离子通道α亚基蛋白结构分析 | 第82-85页 |
| 第三章 家蚕乙酰胆碱酯酶基因的原核表达 | 第85-94页 |
| 1. 引言 | 第85-86页 |
| 2. 材料与方法 | 第86-87页 |
| ·材料 | 第86页 |
| ·质粒、菌株、培养基 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-87页 |
| ·表达质粒的构建 | 第86页 |
| ·诱导表达及表达产物鉴定 | 第86-87页 |
| 3. 结果与分析 | 第87-92页 |
| ·家蚕乙酰胆碱酯酶基因原核表达载体构建 | 第87-88页 |
| ·PCR 鉴定结果 | 第87-88页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第88页 |
| ·家蚕乙酰胆碱酯酶基因在大肠杆菌中的诱导表达及表达产物鉴定 | 第88-92页 |
| ·不同诱导物浓度对表达差异的影响 | 第89-90页 |
| ·相同诱导物浓度、不同诱导时间对表达差异的影响 | 第90页 |
| ·优化表达条件下不同质粒同步诱导情况 | 第90-91页 |
| ·不同诱导温度对表达产物可溶性的影响 | 第91-92页 |
| 4. 讨论 | 第92-94页 |
| 第四章 家蚕AChR 和GABA 配体门控氯通道α亚基的真核表达 | 第94-102页 |
| 1. 引言 | 第94-95页 |
| 2. 材料与方法 | 第95-97页 |
| ·实验材料及主要试剂 | 第95页 |
| ·质粒和菌株 | 第95页 |
| ·主要试剂 | 第95页 |
| ·实验方法 | 第95-97页 |
| ·家蚕乙酰胆碱受体α亚基基因真核表达供体质粒构建 | 第95页 |
| ·家蚕GABA 配体门控α亚基基因真核表达供体质粒构建 | 第95-96页 |
| ·昆虫细胞的培养 | 第96页 |
| ·重组昆虫杆状病毒的构建 | 第96-97页 |
| ·重组病毒DNA 转染昆虫细胞 | 第97页 |
| ·重组蛋白质的表达及检测 | 第97页 |
| 3. 结果与分析 | 第97-101页 |
| ·家蚕AChR 和GABA α亚基全长ORF 引入酶切位点扩增结果 | 第97-98页 |
| ·供体质粒酶切鉴定结果 | 第98-99页 |
| ·重组杆状病毒的筛选和鉴定 | 第99页 |
| ·目的蛋白的真核表达结果 | 第99-101页 |
| ·家蚕AChR α亚基在TN-5 细胞中的表达结果 | 第99-100页 |
| ·家蚕GABA 配体门控α亚基在TN-5 细胞中的表达结果 | 第100-101页 |
| 4. 讨论 | 第101-102页 |
| 第五章 斜纹夜蛾EcR 基因RNAi 与印楝素作用关系初探 | 第102-112页 |
| 1. 引言 | 第102-103页 |
| 2. 材料与方法 | 第103-106页 |
| ·实验材料及主要试剂 | 第103-104页 |
| ·供试材料 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103-104页 |
| ·实验方法 | 第104-106页 |
| ·斜纹夜蛾个体总RNA 提取 | 第104页 |
| ·第一链cDNA 合成 | 第104页 |
| ·兼并引物设计 | 第104-105页 |
| ·PCR 扩增体系和条件 | 第105页 |
| ·常规PCR 扩增 | 第105页 |
| ·兼并引物PCR 扩增 | 第105页 |
| ·印楝素处理SL 细胞实验 | 第105-106页 |
| ·EcR RNAi 及印楝素处理 | 第106页 |
| ·EcR 双链RNA 的合成 | 第106页 |
| ·斜纹夜蛾三龄幼虫进行EcR 基因RNAi 注射试验方案 | 第106页 |
| 3. 结果与分析 | 第106-111页 |
| ·EcR 兼并引物在斜纹夜蛾中的扩增结果 | 第106-108页 |
| ·印楝素处理SL 细胞实验结果 | 第108-109页 |
| ·Az 处理SL 细胞形态观察结果 | 第108页 |
| ·RT-PCR 检测Az 处理SL 细胞形态观察结果 | 第108-109页 |
| ·EcR-RNAi 及印楝素干扰在斜纹夜蛾中的实验结果 | 第109-111页 |
| ·EcR-RNAi 干扰对斜纹夜蛾生长、发育以及变态过程的影响 | 第109-110页 |
| ·EcR-RNAi 干扰以后添加印楝素处理组实验结果 | 第110-111页 |
| 4. 讨论 | 第111-112页 |
| 附：第六章 ISSR 和SCAR 方法在鉴定嗜尸性蝇种中的应用 | 第112-122页 |
| 1. 引言 | 第113-114页 |
| 2. 材料与方法 | 第114-116页 |
| ·材料选取 | 第114页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第114-115页 |
| ·ISSR 扩增反应及检测 | 第115-116页 |
| ·引物筛选 | 第115页 |
| ·ISSR-PCR 反应条件及程序 | 第115-116页 |
| 3. 实验结果 | 第116-120页 |
| ·基因组DNA 提取和引物筛选扩增结果及多态性分析 | 第116-117页 |
| ·种间鉴别 | 第117页 |
| ·种内个体间差异 | 第117-118页 |
| ·SCAR 标记的开发 | 第118-120页 |
| 4. 讨论 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-129页 |
| 总结 | 第129-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
