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盐生杜氏藻MAPK基因的克隆及对烟草的转化

中文摘要第1-3页
Summary第3-9页
前言第9-11页
第一章 文献综述第11-31页
 1 逆境对植物造成的伤害第11-16页
   ·逆境引起的膜伤害第11-12页
     ·影响膜透性及结构第11-12页
     ·发生膜脂过氧化作用第12页
   ·与环境胁迫有关的生理生化效应第12-15页
     ·酶系统的变化第12-13页
     ·代谢途径的改变第13页
     ·胁迫激素的产生第13-14页
     ·逆境诱导蛋白的产生第14-15页
   ·植物抗逆性的获得与信息传导第15-16页
     ·植物逆境反应与植物抗逆性的获得第15页
     ·逆境下细胞水平的信号传导第15-16页
 2 植物抗逆性基因工程研究进展第16-22页
   ·胁迫诱导基因的调控与表达第17页
   ·一些已分离和鉴定的抗逆基因作用机理第17-19页
     ·otsBA 基因和 TPS 基因第17-18页
     ·ImtI 基因第18页
     ·P5CS 基因第18页
     ·mtID 基因和gutD 基因第18页
     ·Bets 基因和BADH 基因第18-19页
   ·通过基因转移改良植物抗逆性第19-22页
     ·导入脂肪酸去饱和代谢关键酶基因的研究第19-20页
     ·导入SOD 等基因的研究第20页
     ·果聚糖积累改善了转基因烟草Nicotiana tabacum 的抗旱性第20页
     ·CoR(cold-regulated)蛋白基因第20页
     ·导入AFP 蛋白基因的研究第20-21页
     ·ABA 和Ca2+在植物抗冻基因表达中的调节作用第21-22页
     ·LEA 蛋白基因第22页
 3 MAPK 的功能特点及级联信号通路第22-31页
   ·动物中的MAPK第23页
   ·植物体中MAPK第23-25页
     ·MAPK 的结构特点第23-24页
     ·植物体中的MAPK 家族成员第24-25页
   ·MAPK 在植物体中的功能与特点第25-29页
     ·MAPK 与植物激素第25-26页
     ·MAPK 与植物防御反应第26-27页
     ·MAPK 与非生物胁迫第27页
     ·MAPK 与细胞周期的调节第27-28页
     ·植物细胞中MAPK 作用的特性第28-29页
   ·植物体中的MAPK 级联信号通路第29-31页
     ·MAPK 级联信号通路的组成第29页
     ·支架蛋白(Scaffolding Proteins)与MAPK 级联的调节第29-31页
第二章 盐生杜氏藻MAPK 基因的克隆第31-40页
 1 材料和方法第31-33页
   ·材料第31页
     ·实验用藻种、工程菌和克隆载体第31页
     ·其它试剂及试剂盒第31页
   ·方法第31-33页
     ·盐生杜氏藻的的培养第31-32页
     ·盐生杜氏藻总RNA 的提取第32页
     ·盐生杜氏藻MAPK 基因部分cDNA 片段克隆第32页
     ·盐生杜氏藻MAPK 基因全长cDNA 的克隆第32-33页
     ·盐生杜氏藻MAPK 基因的进化分析第33页
 2 结果与分析第33-37页
   ·盐生杜氏藻总RNA第33-34页
   ·盐生杜氏藻MAPK 基因部分cDNA 片段的克隆第34-35页
   ·盐生杜氏藻MAPK 基因全长cDNA 的克隆第35-36页
   ·盐生杜氏藻MAPK 基因的进化分析第36-37页
 3. 讨论第37-40页
   ·简并引物的设计第37-38页
   ·盐生杜氏藻总RNA 的提取第38页
   ·盐生杜氏藻MAPK 基因部分cDNA 片段的克隆第38页
   ·盐生杜氏藻MAPK 基因全长cDNA 的克隆第38-40页
第三章 盐生杜氏藻MAPK 基因植物表达载体的构建第40-49页
 1 材料和方法第40-46页
   ·材料第40-41页
     ·菌株及质粒第40页
     ·酶及试剂盒第40页
     ·仪器第40-41页
     ·培养基及溶液的配制第41页
   ·方法第41-46页
     ·质粒pBI121 酶切第41-42页
     ·盐生杜氏藻MAPK 基因酶切第42页
     ·酶切片段回收第42页
     ·载体pBI121-MAPK 的构建第42-43页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第43-44页
       ·感受态细胞制备采用CaCl_2 法第43-44页
       ·转化采用热激法第44页
     ·质粒pBI121-MAPK 的提取第44-45页
     ·农杆菌感受态细胞的制备及转化第45页
       ·感受态细胞制备采用CaCl_2 法第45页
       ·转化采用冻融法第45页
     ·连接子的检测第45-46页
 2. 结果和分析第46-47页
   ·质粒pBI121 酶切第46页
   ·载体pBI121-MAPK 的构建第46页
   ·农杆菌EHA105 的转化第46-47页
 3 讨论第47-49页
   ·质粒pBI121 酶切第47-48页
   ·载体pBI121-MAPK 的构建第48页
   ·质粒的提取第48页
   ·农杆菌感受态细胞的制备及转化第48-49页
第四章 盐生杜氏藻MAPK基因转化烟草及分子生物学鉴定第49-61页
 1 材料和方法第49-53页
   ·实验材料第49-51页
     ·根癌农杆菌菌株第49页
     ·植物材料第49页
     ·培养基第49-50页
     ·酶及试剂盒第50页
     ·试剂第50-51页
   ·实验方法第51-53页
     ·烟草再生体系的建立第51页
       ·无菌苗的培养第51页
       ·烟草再生体系的建立第51页
       ·卡那霉素选择压的确定第51页
     ·根癌农杆菌的培养第51-52页
     ·农杆菌介导MAPK 基因的转化第52页
     ·诱导丛生芽第52页
     ·诱导生根第52页
     ·烟草 DNA 的提取第52-53页
     ·转基因烟草的PCR 检测第53页
     ·再生植株的移栽第53页
 2 结果与分析第53-56页
   ·烟草再生体系的建立第53-56页
     ·烟草无菌苗的培养第53-54页
     ·不同培养基对叶片分化的影响第54页
     ·根的诱导第54页
     ·卡那霉素选择压的确定第54-56页
   ·转基因植株获得第56页
   ·转化植株的PCR 检测第56页
   ·移栽第56页
 3. 讨论第56-61页
   ·烟草种子灭菌第56-57页
   ·烟草叶片愈伤组织的获得第57-58页
   ·烟草再生体系的建立第58页
   ·卡那霉素的筛选过程第58-59页
   ·叶盘法转化烟草第59页
   ·诱导丛生芽第59页
   ·转化植株的PCR 检测第59-61页
结论第61-62页
参考文献:第62-72页
附图第72-74页
致谢第74-75页
作者简介第75-76页
导师简介第76-77页

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