| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| ·未培养微生物 | 第11-13页 |
| ·环境微生物混合基因组 DNA的提取和纯化 | 第13-14页 |
| ·混合基因组 DNA的提取 | 第13页 |
| ·混合基因组 DNA的纯化 | 第13-14页 |
| ·宏基因组文库 | 第14-19页 |
| ·宏基因组文库的构建 | 第14-16页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第16-19页 |
| ·基于功能基因表达的筛选方法 | 第16-17页 |
| ·基于序列特异性的筛选方法 | 第17-19页 |
| ·宏基因组文库的测序 | 第19页 |
| ·纤维素与纤维素酶 | 第19-25页 |
| ·纤维素 | 第19-20页 |
| ·降解纤维素的微生物 | 第20-22页 |
| ·微生物的纤维素酶 | 第22页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第22-24页 |
| ·纤维素酶基因的克隆和鉴定 | 第24页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第24-25页 |
| ·本研究的目的 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-44页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·环境样品 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26-28页 |
| ·菌种保存 | 第28页 |
| ·培养基、培养条件和抗生素 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·培养条件 | 第29页 |
| ·常规试剂、溶液和缓冲液 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-44页 |
| ·质粒提取 | 第30页 |
| ·DNA的酶切、连接和电泳 | 第30页 |
| ·电透析洗脱法回收 DNA片段 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒的转化 | 第31-32页 |
| ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第31-32页 |
| ·氯化铷法制备大肠杆菌感受态细胞 | 第32页 |
| ·转化反应 | 第32页 |
| ·环境样品宏基因组 DNA的提取 | 第32-34页 |
| ·直接提取法 | 第32-33页 |
| ·间接提取法 | 第33-34页 |
| ·环境样品宏基因组 DNA的纯化 | 第34页 |
| ·环境中细菌的系统发育和多样性分析 | 第34-35页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物宏基因组文库的构建 | 第35-36页 |
| ·文库中表达纤维素酶活性克隆的筛选 | 第36-37页 |
| ·文库中纤维素酶基因的克隆 | 第37页 |
| ·GenBank索引号 | 第37页 |
| ·PCR引物设计与基因扩增 | 第37-38页 |
| ·基因的表达与检测 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳所需的溶液和试剂 | 第39页 |
| ·SDS-PAGE电泳过程 | 第39-40页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40-41页 |
| ·内切葡聚糖酶的酶活测定 | 第41-43页 |
| ·糖类的薄层层析 | 第43页 |
| ·粘度测定 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-68页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物的采集 | 第44页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物的宏基因组DNA的提取和纯化 | 第44-46页 |
| ·间接提取法提取宏基因组DNA | 第44-45页 |
| ·直接提取法提取宏基因组DNA | 第45页 |
| ·宏基因组 DNA的纯化 | 第45-46页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物的细菌多样性分析 | 第46页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物宏基因组文库的构建 | 第46-49页 |
| ·宏基因组文库中纤维素酶活性克隆的筛选 | 第49-51页 |
| ·活性克隆中纤维素酶基因的克隆和鉴定 | 第51-62页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5F的克隆和鉴定 | 第52-54页 |
| ·内切葡聚糖酶基因umcel5L的克隆和鉴定 | 第54-57页 |
| ·纤维糊精酶基因umcel5M的克隆和鉴定 | 第57-59页 |
| ·β-葡萄糖营酶基因umbgl3D的克隆和鉴定 | 第59-62页 |
| ·内切葡聚糖酶Umcel5F的纯化 | 第62-64页 |
| ·使用镍柱(Ni-NTA agarose)纯化 Umcel5F | 第62页 |
| ·使用阴离子交换柱Source 15Q纯化Umcel5F | 第62-63页 |
| ·内切葡聚糖酶 Umcel5F的纯化结果 | 第63-64页 |
| ·Umcel5F的酶学特性分析 | 第64-68页 |
| ·Umcel5F的最适反应pH值 | 第64页 |
| ·Umcel5F的最适反应温度 | 第64-65页 |
| ·Umcel5F的pH耐受性 | 第65页 |
| ·Umcel5F的温度耐受性 | 第65-66页 |
| ·Umcel5F的 Km和 Vmax测定 | 第66页 |
| ·Umcel5F的底物特异性分析 | 第66-67页 |
| ·Umcel5F水解 CMC的粘度测定 | 第67-68页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第68-71页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物的细菌多样性分析 | 第68页 |
| ·造纸废水纸浆沉淀物宏基因组文库的构建 | 第68-69页 |
| ·宏基因组文库的筛选及纤维素酶基因的克隆和鉴定 | 第69页 |
| ·重组内切葡聚糖酶 Umcel5F的纯化和酶学特性鉴定 | 第69-70页 |
| ·宏基因组文库技术展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间所发表论文和取得的研究成果 | 第81-82页 |
