| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 绪论 | 第12-19页 |
| 1.慢病毒载体系统 | 第13-14页 |
| ·慢病毒载体的基本结构 | 第13页 |
| ·提高慢病毒载体系统安全性的策略 | 第13-14页 |
| 2.慢病毒载体包装细胞系 | 第14-16页 |
| ·四环素诱导的包装细胞系 | 第15-16页 |
| ·蜕皮激素诱导的包装细胞系 | 第16页 |
| 3.慢病毒载体在转基因动物和基因治疗方面的应用及其结构优化 | 第16-17页 |
| 4.展望 | 第17-19页 |
| 第1章 共转染得到细胞克隆 | 第19-34页 |
| 1.材料 | 第19-22页 |
| 2.方法 | 第22-26页 |
| ·细胞复苏、传代与冻存 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22页 |
| ·酶切、凝胶回收、PCR回收、连接及转化 | 第22-23页 |
| ·质粒构建与鉴定 | 第23-24页 |
| ·单质粒诱导表达载体的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·瞬时转染产生慢病毒 | 第25页 |
| ·293FT细胞Zeocin抗性筛选浓度的测定 | 第25页 |
| ·抗性细胞克隆的获得 | 第25-26页 |
| ·电穿孔转染 | 第25-26页 |
| ·脂质体转染 | 第26页 |
| 3.结果 | 第26-33页 |
| ·慢病毒载体系统各质粒的构建 | 第26-30页 |
| ·单质粒诱导表达载体的诱导表达效果考察 | 第30-31页 |
| ·共转染产生慢病毒 | 第31-32页 |
| ·药物筛选浓度的测定 | 第32页 |
| ·共转染得到抗性细胞克隆 | 第32-33页 |
| 4.讨论 | 第33-34页 |
| 第2章 抗性细胞克隆的鉴定及病毒的产生 | 第34-47页 |
| 1.材料 | 第34-37页 |
| 2.方法 | 第37-42页 |
| ·DNA水平的鉴定 | 第37-38页 |
| ·细胞基因组的提取 | 第37页 |
| ·PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·RNA水平的鉴定 | 第38-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·去除RNA中的基因组DNA | 第39页 |
| ·RT-PCR | 第39-40页 |
| ·Northern blot | 第40-41页 |
| ·慢病毒的产生 | 第41-42页 |
| ·慢病毒的产生及慢病毒滴度的测定 | 第41-42页 |
| ·可复制病毒的检测 | 第42页 |
| 3.结果 | 第42-45页 |
| ·细胞克隆的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·细胞克隆的RT-PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| ·包膜蛋白VSVG的诱导表达 | 第43-45页 |
| ·转染包装细胞系获得慢病毒及病毒滴度的测定 | 第45页 |
| ·可复制病毒的检测 | 第45页 |
| 4.讨论 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 致谢 | 第51页 |