| 绪论 | 第1-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·引言 | 第12-13页 |
| ·蛋白质折叠复性的方法学基础 | 第13-16页 |
| ·包涵体的形成 | 第13页 |
| ·蛋白质的变性和复性 | 第13-15页 |
| ·蛋白质的折叠路径及聚集体的产生 | 第15-16页 |
| ·蛋白质体外复性的方法 | 第16-20页 |
| ·透析和稀释复性法 | 第16-17页 |
| ·层析折叠复性 | 第17-18页 |
| ·折叠促进剂协助复性 | 第18-19页 |
| ·分子伴侣及折叠酶协助复性 | 第19页 |
| ·其他复性方法 | 第19-20页 |
| ·二硫键的形成及二硫键异构酶 | 第20-22页 |
| ·蛋白质折叠过程与二硫键的形成 | 第20-21页 |
| ·二硫键异构酶及其生物学性质 | 第21-22页 |
| ·二硫键异构酶的异构酶活性 | 第21-22页 |
| ·二硫键异构酶的分子伴侣活性 | 第22页 |
| ·疏基氧化还原蛋白Dsb家族与DsbA | 第22-25页 |
| ·Dsb蛋白的发现 | 第22-23页 |
| ·Dsb家族概况 | 第23页 |
| ·DsbA的结构与性质 | 第23-25页 |
| ·蛋白质折叠研究的实验技术 | 第25-26页 |
| ·荧光光谱法 | 第25-26页 |
| ·圆二色光谱法 | 第26页 |
| ·本文研究思路 | 第26-28页 |
| ·核糖核酸酶A | 第26-27页 |
| ·本文研究思路 | 第27-28页 |
| 第二章 核糖核酸酶A的变性 | 第28-39页 |
| ·引言 | 第28-29页 |
| ·实验材料与仪器 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·自由疏基测定方法 | 第29-30页 |
| ·蛋白质含量的测定─考马斯亮蓝法 | 第30-31页 |
| ·RNaseA活性测定 | 第31-33页 |
| ·RNaseA的荧光结构表征 | 第33-34页 |
| ·实验结果和讨论 | 第34-38页 |
| ·脲对RNase A变性作用 | 第34页 |
| ·DTT对RNaseA变性的影响 | 第34-35页 |
| ·变性过程 RNase A的性质变化 | 第35-37页 |
| ·RNaseA变性过程机理探讨 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 核糖核酸酶 A的稀释复性及复性动力学研究 | 第39-61页 |
| ·引言 | 第39-42页 |
| ·实验材料与仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·仪器设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42页 |
| ·RNase A的变性 | 第42页 |
| ·RNase A的稀释复性 | 第42页 |
| ·RNaseA的稀释复性 | 第42-51页 |
| ·稀释倍数对RNaseA复性的影响 | 第43-44页 |
| ·复性温度对 RNase A复性的影响 | 第44页 |
| ·氧化还原环境对 RNase A复性的影响 | 第44-47页 |
| ·pH值对 RNaseA复性的影响 | 第47页 |
| ·脲浓度对 RNase A复性的影响 | 第47-48页 |
| ·凝集抑制剂对 RNase A复性的影响 | 第48-49页 |
| ·荧光光谱法表征 RNase A复性过程空间结构的变化 | 第49-51页 |
| ·RNase A复性荧光光谱 | 第49-50页 |
| ·RNase A体外重折叠过程机理 | 第50-51页 |
| ·RNase A复性动力学研究 | 第51-59页 |
| ·动力学模型的提出 | 第51-52页 |
| ·动力学模型的求解 | 第52-53页 |
| ·实验结果与复性动力学模型分析 | 第53-59页 |
| ·数据拟合及动力学常数的求取 | 第53-57页 |
| ·蛋白质初始浓度对复性动力学常数的影响 | 第57页 |
| ·脲浓度对复性动力学常数的影响 | 第57-59页 |
| ·对复性动力学模型的评价 | 第59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 折叠酶 DsbA的发酵与纯化 | 第61-71页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·实验材料与仪器 | 第61-64页 |
| ·菌种与质粒 | 第61-63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·实验仪器 | 第63页 |
| ·层析系统 | 第63页 |
| ·溶液 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-66页 |
| ·质粒抽提 | 第64页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第64页 |
| ·质粒的转化 | 第64页 |
| ·DsbA的发酵制备 | 第64-65页 |
| ·基于统计原理的实验设计 | 第65页 |
| ·细胞破碎 | 第65页 |
| ·离子交换法纯化DsbA | 第65-66页 |
| ·实验结果和讨论 | 第66-70页 |
| ·DsbA的表达 | 第66-67页 |
| ·DsbA表达条件的优化 | 第67-69页 |
| ·离子交换层析法纯化DsbA | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-71页 |
| 第五章 DsbA介导的核糖核酸酶A体外复性初步研究 | 第71-77页 |
| ·引言 | 第71页 |
| ·实验材料与仪器 | 第71页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·实验仪器 | 第71页 |
| ·实验方法 | 第71-72页 |
| ·透析袋的预处理 | 第71-72页 |
| ·DsbA的浓缩 | 第72页 |
| ·DsbA协助RNase A的体外复性 | 第72页 |
| ·实验结果与讨论 | 第72-76页 |
| ·DsbA对RNase A折叠速率的影响 | 第72-74页 |
| ·DsbA对RNase A复性酶活回收率的影响 | 第74页 |
| ·DsbA对RNase A复性动力学常数的影响 | 第74-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第六章 结论与建议 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| ·建议 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 符号说明 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第86页 |