| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1 转基因技术在玉米中的应用 | 第11-19页 |
| ·转基因技术的应用 | 第11-12页 |
| ·转基因的受体 | 第12-13页 |
| ·外植体 | 第12页 |
| ·悬浮细胞 | 第12页 |
| ·原生质体 | 第12-13页 |
| ·愈伤组织 | 第13页 |
| ·常用的转基因转化方法 | 第13-17页 |
| ·基因枪法 | 第13页 |
| ·PEG法 | 第13-14页 |
| ·显微注射法 | 第14页 |
| ·电击法 | 第14页 |
| ·花粉管通道法 | 第14-15页 |
| ·农杆菌法 | 第15-17页 |
| ·转基因的检测方法 | 第17-19页 |
| ·PCR | 第17页 |
| ·Southern blotting | 第17-18页 |
| ·其它检测方法 | 第18页 |
| ·Northern blotting | 第18页 |
| ·RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) | 第18页 |
| ·Western blotting | 第18-19页 |
| ·ELISA检测 | 第19页 |
| ·酶活检测 | 第19页 |
| 2. 转基因玉米的研究进展 | 第19-22页 |
| ·抗虫转基因玉米 | 第19-20页 |
| ·抗病转基因玉米 | 第20页 |
| ·抗除草剂转基因玉米 | 第20页 |
| ·耐盐、耐旱转基因玉米 | 第20-21页 |
| ·高品质转基因玉米 | 第21-22页 |
| ·高淀粉转基因玉米 | 第21页 |
| ·高蛋白、高赖氨酸转基因玉米 | 第21页 |
| ·高植酸酶转基因玉米 | 第21-22页 |
| 3. 氮素对玉米的影响 | 第22-23页 |
| 4. 谷氨酰胺合成酶(GS) | 第23-27页 |
| ·GS同工酶的种类及在细胞中的定位 | 第23页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)在分子生物学方面的研究进展 | 第23-24页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)的基因及其编码的几种多肽 | 第23-24页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)基因的结构 | 第24页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)对植物的作用 | 第24-25页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)遗传转化的研究进展 | 第25-27页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 6 本研究的技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第29-47页 |
| 1. 实验材料 | 第29-31页 |
| ·玉米材料 | 第29页 |
| ·细菌、质粒和引物 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-31页 |
| ·幼胚培养基 | 第29-30页 |
| ·愈伤组织培养基 | 第30页 |
| ·细菌培养基 | 第30页 |
| ·抗生素和激素 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-47页 |
| ·谷氨酰胺合成酶Gln1-3基因的获得 | 第31-33页 |
| ·同源克隆玉米Gln1-3基因 | 第31-32页 |
| ·酶切片段的回收 | 第32-33页 |
| ·目的基因克隆测序 | 第33页 |
| ·表达载体Ubiquitin1301—Gln1-3的构建 | 第33-36页 |
| ·质粒Ubiquitin1301的转化 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·目的表达载体的获得 | 第34-35页 |
| ·酶切片段的回收 | 第35页 |
| ·目的基因Gln1-3连入pMD19-T载体 | 第35页 |
| ·E.coli的热激转化(无菌操作) | 第35页 |
| ·提取质粒DNA | 第35页 |
| ·酶切获得目的基因 | 第35-36页 |
| ·酶切片段的回收 | 第36页 |
| ·将目的基因基因谷氨酰胺合成酶Gln1-3连入表达载体Ubiquitin1301 | 第36页 |
| ·E.coli的热激转化(无菌操作) | 第36页 |
| ·提取质粒DNA | 第36页 |
| ·表达载体pcambia 1301—Gln1-3的构建 | 第36-39页 |
| ·35S启动子的获得 | 第36页 |
| ·对表达载体Ubiquitin1301—Gln1-3的酶切 | 第36-37页 |
| ·将35S启动子连入表达载体Ubiquitin1301—Gln1-3 | 第37页 |
| ·E.coli的热激转化(无菌操作) | 第37页 |
| ·阳性单克隆检测 | 第37-38页 |
| ·提取质粒DNA | 第38-39页 |
| ·植物表达载体质粒转化农杆菌 | 第39-40页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·表达质粒热激转化农杆菌感受态细胞 | 第40页 |
| ·遗传转化 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·再生植株的分子检测 | 第41-47页 |
| ·PCR检测 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR | 第42-44页 |
| ·按照调适各样品cDNA浓度进行目的基因PCR扩增电泳检测 | 第44-45页 |
| ·谷氨酰胺合成酶(GS)酶活测定 | 第45-46页 |
| ·光合作用、叶氮含量等生理指标的测定 | 第46页 |
| ·T1代转基因种子产量性状鉴 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-60页 |
| 1 目的基因Gln1-3的获得 | 第47-49页 |
| 2 表达载体Ubiquitin1301—Gln1-3的构建 | 第49-50页 |
| 3 表达载体pcambia1301—Gln1-3的构建 | 第50-51页 |
| 4 T0代再生植株的分子检测 | 第51-53页 |
| 5 T0代转基因性植株的谷氨酰胺合成酶活力检测 | 第53-54页 |
| 6 T1代转基因植株的分子检测 | 第54-55页 |
| 7 T1代转基因植株的半定量RT-PCR检测 | 第55页 |
| 8 T1代转基因植株的谷氨酰胺合成酶活力检测 | 第55-57页 |
| 9 T1代转基因植株授粉后功能叶含氮量检测 | 第57-58页 |
| 10 T1代转基因植株授粉后功能叶光合效率检测 | 第58-59页 |
| 11 T1代转基因植株产量性状 | 第59-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-63页 |
| 1 目的基因的生理功能及启动子对表达水平的影响 | 第60页 |
| 2 谷氨酰胺合成酶与氮转运效率、光合效率及产量性状的关系 | 第60-61页 |
| 3 关于谷氨酰胺合成酶酶活力测定 | 第61页 |
| 4 培育高产转基因玉米品种的方法探讨 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
