| 缩写词表(ABBREVIATIONS) | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-30页 |
| 1. 三脂酰甘油(TAG)的生物合成 | 第13-18页 |
| ·脂肪酸的合成 | 第14-16页 |
| ·TAG 的生物合成 | 第16-17页 |
| ·TAG 的去饱和过程 | 第17页 |
| ·油体的形成 | 第17-18页 |
| 2. 二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)的研究现状 | 第18-22页 |
| ·编码 DGAT 类似蛋白的基因家族 | 第18-19页 |
| ·有关 DGAT1 基因功能的研究 | 第19-21页 |
| ·DGAT1 基因在拟南芥中的研究 | 第21-22页 |
| 3. RNAI(RNA INTERFERENCE)研究概况 | 第22-28页 |
| ·RNAi 的分子机制 | 第22-25页 |
| ·RNAi 的生物学功能 | 第25-26页 |
| ·RNAi 技术在植物功能基因组研究中的应用 | 第26-28页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-52页 |
| 1. 实验材料 | 第30-34页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒 | 第30-31页 |
| ·植物材料 | 第31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·使用的药品和常用试剂 | 第31-34页 |
| 2. 实验方法 | 第34-52页 |
| ·植物总 DNA 的微量提取(SDS 法) | 第34-35页 |
| ·植物总 DNA 的大量提取(CTAB 法,改自Porebski,1997) | 第35-36页 |
| ·质粒 DNA 的微量提取(碱裂解法) | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第37页 |
| ·普通 PCR 扩增 | 第37-38页 |
| ·植物总 RNA 的提取(Trizol 试剂法) | 第38页 |
| ·RNA 的变性凝胶电泳 | 第38-39页 |
| ·Northern 杂交 | 第39-42页 |
| ·DNase I (RNase free) 消化 Total RNA | 第42-43页 |
| ·cDNA 第一条链的反转录合成 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR 法检测转基因植株基因转录水平 | 第44页 |
| ·用玻璃奶方法回收 DNA 片段(道普公司试剂盒) | 第44-45页 |
| ·用离心柱法回收 DNA 片段(鼎国公司试剂盒) | 第45页 |
| ·PCR 产物末端加A 反应 | 第45页 |
| ·酶切与连接反应 | 第45-46页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备及其转化 | 第46-47页 |
| ·农杆菌双元载体中mini-Ti 质粒提取 | 第47-48页 |
| ·烟草的遗传转化 | 第48-49页 |
| ·烟草总脂的提取、分离及脂肪酸组成分析 | 第49-50页 |
| ·种子内蛋白和糖类的提取及含量测定 | 第50-52页 |
| 第三章 烟草DGAT1 基因沉默表达载体构建与转基因植株的筛选 | 第52-61页 |
| 1 材料和方法 | 第52-55页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·烟草 NtDGAT1 基因cDNA 中间片段的扩增 | 第52-53页 |
| ·RNAi 沉默表达载体的构建 | 第53页 |
| ·烟草的转化与培养 | 第53-54页 |
| ·烟草转化株的PCR 筛选 | 第54-55页 |
| 2. 结果与分析 | 第55-60页 |
| ·NtDGAT1 基因cDNA 中间片段的克隆 | 第56页 |
| ·沉默表达载体pAT-DHP 的构建 | 第56-59页 |
| ·转基因烟草植株的初步鉴定 | 第59-60页 |
| 3. 讨论 | 第60-61页 |
| 第四章 DGAT1 基因的沉默对转基因烟草植株不同器官油脂水平的影响 | 第61-69页 |
| 1 材料与方法 | 第62页 |
| ·实验材料 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62页 |
| 2 实验结果 | 第62-67页 |
| ·转基因植株 Si17 的花与种子中 DGAT1 基因的表达研究 | 第62-63页 |
| ·转基因植株 Si17 不同器官的沉默效果 | 第63-66页 |
| ·不同器官中 DGAT1 基因的转录水平 | 第66-67页 |
| 3. 讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 烟草中DGAT1 基因的沉默对种子内油脂、蛋白质和糖类代谢的影响. | 第69-77页 |
| 1 材料与方法 | 第70页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·方法 | 第70页 |
| 2. 实验结果 | 第70-75页 |
| ·利用RT-PCR 方法检测转基因植株中DGAT1 基因的转录水平 | 第70-71页 |
| ·DGAT1 基因的沉默引起转基因植株种子内TAG 含量的降低 | 第71-73页 |
| ·转基因植株的种子重量下降 | 第73页 |
| ·转基因植株种子中油脂、蛋白和糖之间的合成代谢关系变化 | 第73-75页 |
| 3. 讨论 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-94页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
