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三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)盐度调控相关基因的筛选

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
引言第12-13页
第一章 文献综述第13-20页
   ·甲壳动物的渗透压调节第13-15页
     ·渗透调节的主要器官和部位第13-14页
       ·鳃第13页
       ·触角腺和小颚腺第13-14页
     ·相关的基因第14-15页
       ·ATPase 基因第14页
       ·热休克蛋白(HSPs)第14页
       ·碱性磷酸酶(ALP)第14页
       ·碳酸酐酶(CA)第14-15页
       ·LvCHH-ITP 基因第15页
       ·14-3-3 基因第15页
   ·cDNA 文库第15-17页
     ·cDNA 文库简介第15-17页
       ·经典cDNA 文库第15-16页
         ·经典cDNA 文库构建的基本原理第15-16页
         ·经典cDNA 文库构建的流程第16页
       ·SMART cDNA 文库第16页
         ·SMART cDNA 文库构建的基本原理第16页
         ·SMART cDNA 文库构建的流程第16页
       ·SMART cDNA 文库的优点第16-17页
     ·cDNA 文库的应用第17页
   ·基因芯片技术及应用第17-18页
     ·基因芯片的原理第17页
     ·基因芯片的应用第17-18页
   ·定量PCR 技术及应用第18页
     ·定量PCR 的原理第18页
     ·定量 PCR 的应用第18页
   ·本研究的目的与意义第18-20页
第二章 三疣梭子蟹鳃cDNA 文库的构建及序列分析第20-38页
   ·材料方法第20-24页
     ·材料第20页
     ·仪器与试剂第20页
       ·仪器第20页
       ·主要试剂第20页
     ·实验方法第20-24页
       ·RNA 提取与检测第20-21页
       ·cDNA 文库构建第21-24页
         ·cDNA 第一链合成第21-22页
         ·LD PCR 扩增cDNA第22页
         ·蛋白酶K 与限制性内切酶SfiⅠ消化第22-23页
         ·cDNA 的分级分离第23页
         ·将cDNA 克隆到pBluescript II SK (+)载体上第23页
         ·重组质粒的转化第23-24页
       ·测序第24页
       ·数据分析与注释第24页
   ·结果与讨论第24-38页
     ·EST 的获得第24-25页
     ·聚类分析第25-26页
     ·功能注释与ESTs 分类第26-29页
     ·与盐度调控相关的候选基因第29-38页
       ·抗氧化活性第30页
       ·转运蛋白第30页
       ·胁迫相关蛋白第30页
       ·信号转导和蛋白合成第30页
       ·新陈代谢和能量代谢第30-38页
第三章 基因芯片杂交第38-47页
   ·材料与方法第38-41页
     ·材料第38页
     ·仪器与试剂第38页
       ·仪器第38页
       ·试剂第38页
     ·方法第38-41页
       ·cDNA 芯片样品的制备第38-39页
         ·PCR 扩增目的片断第39页
         ·PCR 产物的纯化第39页
         ·PCR 产物的溶解和保存第39页
       ·杂交样本的制备第39-40页
         ·RNA 的提取第39-40页
         ·对样品 RNA 进行荧光标记第40页
       ·杂交与清洗第40-41页
   ·实验结果第41-47页
     ·基因电泳档案第41-43页
     ·基因芯片扫描结果第43-44页
     ·芯片杂交结果聚类分析第44-45页
     ·芯片数据分析结果第45-47页
第四章 荧光定量 PCR 检测第47-54页
   ·材料与方法第47-49页
     ·材料第47页
     ·仪器与试剂第47页
       ·仪器第47页
       ·试剂第47页
     ·实验方法第47-49页
       ·模板的准备第47-48页
         ·总RNA 的提取第47-48页
         ·cDNA 模板的制备第48页
       ·定量PCR 反应系统的建立第48-49页
         ·内参基因的筛选第48页
         ·反应条件的摸索第48页
         ·定量PCR 分析第48-49页
   ·结果与讨论第49-54页
第五章 结论与展望第54-56页
   ·主要结论第54-55页
     ·cDNA 文库的构建第54页
     ·序列分析第54页
     ·cDNA 芯片制备第54页
     ·基因芯片杂交与盐度调控基因的筛选第54-55页
     ·荧光定量RT-PCR 验证第55页
   ·展望第55-56页
参考文献第56-60页
附录第60-61页
攻读硕士研究生期间科研成果第61-62页
致谢第62页

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