摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-12页 |
引言 | 第12-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-20页 |
·甲壳动物的渗透压调节 | 第13-15页 |
·渗透调节的主要器官和部位 | 第13-14页 |
·鳃 | 第13页 |
·触角腺和小颚腺 | 第13-14页 |
·相关的基因 | 第14-15页 |
·ATPase 基因 | 第14页 |
·热休克蛋白(HSPs) | 第14页 |
·碱性磷酸酶(ALP) | 第14页 |
·碳酸酐酶(CA) | 第14-15页 |
·LvCHH-ITP 基因 | 第15页 |
·14-3-3 基因 | 第15页 |
·cDNA 文库 | 第15-17页 |
·cDNA 文库简介 | 第15-17页 |
·经典cDNA 文库 | 第15-16页 |
·经典cDNA 文库构建的基本原理 | 第15-16页 |
·经典cDNA 文库构建的流程 | 第16页 |
·SMART cDNA 文库 | 第16页 |
·SMART cDNA 文库构建的基本原理 | 第16页 |
·SMART cDNA 文库构建的流程 | 第16页 |
·SMART cDNA 文库的优点 | 第16-17页 |
·cDNA 文库的应用 | 第17页 |
·基因芯片技术及应用 | 第17-18页 |
·基因芯片的原理 | 第17页 |
·基因芯片的应用 | 第17-18页 |
·定量PCR 技术及应用 | 第18页 |
·定量PCR 的原理 | 第18页 |
·定量 PCR 的应用 | 第18页 |
·本研究的目的与意义 | 第18-20页 |
第二章 三疣梭子蟹鳃cDNA 文库的构建及序列分析 | 第20-38页 |
·材料方法 | 第20-24页 |
·材料 | 第20页 |
·仪器与试剂 | 第20页 |
·仪器 | 第20页 |
·主要试剂 | 第20页 |
·实验方法 | 第20-24页 |
·RNA 提取与检测 | 第20-21页 |
·cDNA 文库构建 | 第21-24页 |
·cDNA 第一链合成 | 第21-22页 |
·LD PCR 扩增cDNA | 第22页 |
·蛋白酶K 与限制性内切酶SfiⅠ消化 | 第22-23页 |
·cDNA 的分级分离 | 第23页 |
·将cDNA 克隆到pBluescript II SK (+)载体上 | 第23页 |
·重组质粒的转化 | 第23-24页 |
·测序 | 第24页 |
·数据分析与注释 | 第24页 |
·结果与讨论 | 第24-38页 |
·EST 的获得 | 第24-25页 |
·聚类分析 | 第25-26页 |
·功能注释与ESTs 分类 | 第26-29页 |
·与盐度调控相关的候选基因 | 第29-38页 |
·抗氧化活性 | 第30页 |
·转运蛋白 | 第30页 |
·胁迫相关蛋白 | 第30页 |
·信号转导和蛋白合成 | 第30页 |
·新陈代谢和能量代谢 | 第30-38页 |
第三章 基因芯片杂交 | 第38-47页 |
·材料与方法 | 第38-41页 |
·材料 | 第38页 |
·仪器与试剂 | 第38页 |
·仪器 | 第38页 |
·试剂 | 第38页 |
·方法 | 第38-41页 |
·cDNA 芯片样品的制备 | 第38-39页 |
·PCR 扩增目的片断 | 第39页 |
·PCR 产物的纯化 | 第39页 |
·PCR 产物的溶解和保存 | 第39页 |
·杂交样本的制备 | 第39-40页 |
·RNA 的提取 | 第39-40页 |
·对样品 RNA 进行荧光标记 | 第40页 |
·杂交与清洗 | 第40-41页 |
·实验结果 | 第41-47页 |
·基因电泳档案 | 第41-43页 |
·基因芯片扫描结果 | 第43-44页 |
·芯片杂交结果聚类分析 | 第44-45页 |
·芯片数据分析结果 | 第45-47页 |
第四章 荧光定量 PCR 检测 | 第47-54页 |
·材料与方法 | 第47-49页 |
·材料 | 第47页 |
·仪器与试剂 | 第47页 |
·仪器 | 第47页 |
·试剂 | 第47页 |
·实验方法 | 第47-49页 |
·模板的准备 | 第47-48页 |
·总RNA 的提取 | 第47-48页 |
·cDNA 模板的制备 | 第48页 |
·定量PCR 反应系统的建立 | 第48-49页 |
·内参基因的筛选 | 第48页 |
·反应条件的摸索 | 第48页 |
·定量PCR 分析 | 第48-49页 |
·结果与讨论 | 第49-54页 |
第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
·主要结论 | 第54-55页 |
·cDNA 文库的构建 | 第54页 |
·序列分析 | 第54页 |
·cDNA 芯片制备 | 第54页 |
·基因芯片杂交与盐度调控基因的筛选 | 第54-55页 |
·荧光定量RT-PCR 验证 | 第55页 |
·展望 | 第55-56页 |
参考文献 | 第56-60页 |
附录 | 第60-61页 |
攻读硕士研究生期间科研成果 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |