| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-19页 |
| 前言 | 第19-26页 |
| 第一章 重组日本血吸虫可溶性虫卵抗原SjP38在大肠杆菌中的表达、纯化及其免疫活性鉴定 | 第26-45页 |
| 1 材料 | 第26-28页 |
| ·血清 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE及Western-blot试剂 | 第27-28页 |
| ·细菌培养基 | 第28页 |
| ·蛋白纯化试剂 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-34页 |
| ·重组质粒pET-32a-SjP38的构建 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增获取SjP38 cDNA全长 | 第28-29页 |
| ·目的基因的酶切、回收 | 第29页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·DNA酶切鉴定 | 第30页 |
| ·基因序列测定 | 第30页 |
| ·pET-32a-SjP38在大肠杆菌中的诱导表达及条件优化 | 第30-31页 |
| ·pET-32a-SjP38在大肠杆菌中的诱导表达 | 第30页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| ·表达条件的优化 | 第31页 |
| ·表达产物的纯化 | 第31-32页 |
| ·pET-32a(+)载体蛋白的制备 | 第32页 |
| ·表达产物的免疫反应性鉴定 | 第32-34页 |
| ·Westem-blot分析 | 第32-33页 |
| ·ELISA分析 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| ·重组质粒pET-32a-SjP38的构建和鉴定 | 第34-35页 |
| ·酶切鉴定重组质粒pET-32a-SjP38 | 第34-35页 |
| ·测序结果 | 第35页 |
| ·pET-32a-SjP38／BL21诱导表达结果 | 第35-36页 |
| ·表达条件的优化 | 第36-39页 |
| ·诱导时机 | 第36-37页 |
| ·诱导时间 | 第37-38页 |
| ·诱导剂浓度 | 第38-39页 |
| ·rSiP38蛋白免疫反应性分析 | 第39-42页 |
| ·Western-blot分析 | 第39-40页 |
| ·rSjP38 ELISA结果 | 第40-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| ·rSjP38克隆 | 第42页 |
| ·rSjP38表达及纯化 | 第42-43页 |
| ·rSjP38免疫活性鉴定 | 第43-44页 |
| 5 小结 | 第44-45页 |
| 第二章 重组SjP38单克隆抗体的制备与鉴定 | 第45-60页 |
| 1 材料 | 第45-47页 |
| ·细胞 | 第45页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·蛋白电泳试剂 | 第45页 |
| ·细胞培养、融合试剂 | 第45页 |
| ·其他试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·主要试剂配制 | 第46-47页 |
| ·细胞培养试剂 | 第46页 |
| ·单克隆抗体纯化试剂 | 第46-47页 |
| ·单克隆抗体标记试剂 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-52页 |
| ·抗原制备 | 第47-48页 |
| ·rSjP38和pET-32a(+)载体蛋白制备 | 第47页 |
| ·日本血吸虫可溶性虫卵抗原制备 | 第47-48页 |
| ·动物免疫 | 第48页 |
| ·细胞融合 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的筛选与克隆化 | 第49页 |
| ·单克隆抗体的Ig类与亚类鉴定 | 第49页 |
| ·诱生腹水及抗体的纯化 | 第49-50页 |
| ·单克隆抗体效价测定 | 第50页 |
| ·抗体亲和力测定 | 第50页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第50-51页 |
| ·单抗与rSjP38、天然SjP38抗原免疫反应性 | 第50页 |
| ·尾蚴、成虫和虫卵与筛选的单抗免疫反应性 | 第50-51页 |
| ·单克隆抗体的标记 | 第51页 |
| ·单克隆抗体配对实验 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-56页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第52页 |
| ·抗体的纯化 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的亚类鉴定 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的效价 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体亲和力测定 | 第54页 |
| ·单克隆抗体的特异性鉴定 | 第54-55页 |
| ·单抗与rSjP38、天然SjP38抗原免疫反应性 | 第54页 |
| ·尾蚴、成虫和虫卵与筛选的单抗免疫反应性 | 第54-55页 |
| ·HRP标记单克隆抗体效价测定 | 第55页 |
| ·单克隆抗体配对实验 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-59页 |
| ·免疫原的选择 | 第57页 |
| ·单克隆抗体的筛选 | 第57页 |
| ·单克隆抗体亚型的鉴定 | 第57-58页 |
| ·单克隆抗体的特异性与敏感性 | 第58页 |
| ·单抗与rSjP38、天然P38抗原免疫反应性 | 第58页 |
| ·尾蚴、成虫、虫卵抗原与单抗免疫反应性 | 第58页 |
| ·单克隆抗体不同表位的配对 | 第58-59页 |
| 5 小结 | 第59-60页 |
| 第三章 应用时间分辨荧光免疫分析技术检测日本血吸虫SjP38抗原和抗体的研究 | 第60-71页 |
| 1 材料 | 第60页 |
| ·动物 | 第60页 |
| ·抗原和抗体 | 第60页 |
| ·应用时间分辨荧光免疫分析技术试剂和材料 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60-63页 |
| ·动物模型的制备 | 第60-61页 |
| ·尾蚴逸出 | 第60-61页 |
| ·感染动物 | 第61页 |
| ·小鼠采血 | 第61页 |
| ·双抗夹心法检测感染血清中的SjP38抗原 | 第61-62页 |
| ·固相包被抗体的制备 | 第61页 |
| ·Eu~(3+)标记抗体的制备及纯化 | 第61页 |
| ·TRFIA中最佳反应模式的选择 | 第61-62页 |
| ·血样的检测 | 第62页 |
| ·数据分析 | 第62页 |
| ·间接法检测感染血清中的SjP38抗体 | 第62-63页 |
| ·固相包被抗体的制备 | 第62页 |
| ·Eu~(3+)标记抗体的制备及纯化 | 第62页 |
| ·标准品的制备 | 第62-63页 |
| ·TRFIA中最佳反应模式的选择 | 第63页 |
| ·血样的检测 | 第63页 |
| ·数据分析 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-68页 |
| ·双抗夹心法检测感染血清中的SjP38抗原 | 第63-66页 |
| ·TRFIA中最佳反应模式的选择 | 第63-64页 |
| ·SjP38抗原检测的标准曲线 | 第64页 |
| ·不同感染阶段小鼠血清的SjP38抗原 | 第64-65页 |
| ·不同感染阶段与SjP38抗原含量的趋势 | 第65-66页 |
| ·间接法检测感染血清中的SjP38抗体 | 第66-68页 |
| ·TRFIA中最佳反应模式的选择 | 第66页 |
| ·SjP38抗体检测的标准曲线 | 第66页 |
| ·不同感染阶段小鼠血清的SjP38抗体 | 第66-67页 |
| ·不同感染阶段与SjP38抗体含量的趋势 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 5 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 以rSjP38及其单克隆抗体为基础的血吸虫病胶体金免疫层析检测法的初步建立 | 第71-80页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| ·动物 | 第71页 |
| ·血清 | 第71页 |
| ·抗原及抗体 | 第71页 |
| ·胶体金免疫层析试剂和材料 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·胶体金标记试剂的配制 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-75页 |
| ·抗体的准备 | 第72页 |
| ·胶体金标记 | 第72-73页 |
| ·胶体金最大吸收峰的确定 | 第72页 |
| ·带标记抗体最适稳定量的确定 | 第72-73页 |
| ·胶体金标记 | 第73页 |
| ·检测试纸条的组装、检测方法及结果判定 | 第73-74页 |
| ·最佳反应模式筛选 | 第74页 |
| ·抗体最佳包被量确定 | 第74页 |
| ·金标抗体最佳稀释倍数的确立 | 第74页 |
| ·灵敏度的检测 | 第74页 |
| ·血样的检测 | 第74-75页 |
| 3 结果 | 第75-77页 |
| ·胶体金标记 | 第75页 |
| ·胶体金最大吸收峰的确定 | 第75页 |
| ·带标记抗体最适稳定量的确定 | 第75页 |
| ·抗体标记后的OD_(528)值 | 第75页 |
| ·检测试纸条的组装、检测方法及结果判定 | 第75-76页 |
| ·最佳反应模式筛选 | 第76页 |
| ·灵敏度的检测 | 第76页 |
| ·血样的检测 | 第76-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 总结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 附录(缩略词表) | 第89-91页 |
| 综述 | 第91-104页 |
| 硕士期间发表论文 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 第一军医大学学位论文原创性声明 | 第107页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第107页 |
