| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1．1 前言 | 第11页 |
| 1．2 应用生物信息学进行基因的电子克隆 | 第11-14页 |
| 1．2．1 生物信息学(Bioinformatics) | 第11-12页 |
| 1．2．2 主要核酸序列数据库 | 第12页 |
| 1．2．3 表达序列标签(EST) | 第12-13页 |
| 1．2．4 基因的电子克隆 | 第13-14页 |
| 1．3 小分子GTP结合蛋白概述 | 第14-15页 |
| 1．4 小泡 | 第15-17页 |
| 1．5 Sar1蛋白简介 | 第17-19页 |
| 1．5．1 Sar1蛋白与COPⅡ型被膜组装 | 第17-18页 |
| 1．5．2 Sar1蛋白结构特点 | 第18-19页 |
| 1．6 Sar1b与脂肪吸收 | 第19-21页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-40页 |
| 3．1 材料 | 第22-27页 |
| 3．1．1 组织样品 | 第22页 |
| 3．1．2 DNA样品 | 第22-23页 |
| 3．1．3 载体和菌株 | 第23-24页 |
| 3．1．4 酶和试剂盒 | 第24-25页 |
| 3．1．5 主要试剂 | 第25页 |
| 3．1．6 主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 3．1．7 主要仪器设备 | 第27页 |
| 3．1．8 主要分子生物学软件和统计软件 | 第27页 |
| 3．2 方法 | 第27-40页 |
| 3．2．1 候选基因的克隆方法 | 第27-30页 |
| 3．2．1．1 猪Sar1b基因EST-重叠群的构建 | 第27-28页 |
| 3．2．1．2 引物设计 | 第28页 |
| 3．2．1．3 总RNA提取 | 第28页 |
| 3．2．1．4 RNA的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第28页 |
| 3．2．1．5 反转录反应(Reverse transcription RT) | 第28-29页 |
| 3．2．1．6 PCR扩增条件 | 第29页 |
| 3．2．1．7 PCR产物的纯化、克隆和测序 | 第29-30页 |
| 3．2．2 基因染色体定位的SCHP和RH法 | 第30-32页 |
| 3．2．2．1 引物设计 | 第30-31页 |
| 3．2．2．2 PCR分型方法 | 第31页 |
| 3．2．2．3 数据分析方法 | 第31-32页 |
| 3．2．3 Sar1b基因组织表达谱研究 | 第32-33页 |
| 3．2．3．1 总RNA的提取及RNA浓度与质量的检测 | 第32页 |
| 3．2．3．2 RT-PCR扩增体系 | 第32页 |
| 3．2．3．3 数据分析 | 第32-33页 |
| 3．2．4 猪Sar1b基因遗传多态性的PCR-SSCP检测 | 第33-34页 |
| 3．2．4．1 PCR反应 | 第33页 |
| 3．2．4．2 SSCP检测 | 第33-34页 |
| 3．2．5 多态标记与性状的关联分析 | 第34页 |
| 3．2．6 猪Sar1b基因的原核表达 | 第34-40页 |
| 3．2．6．1 pET28a-Sar1b重组原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 3．2．6．2 Sar1b蛋白的诱导表达 | 第36页 |
| 3．2．6．3 Sar1b蛋白诱导表达的检测 | 第36-40页 |
| 4 结果 | 第40-56页 |
| 4．1 Sar1b基因的克隆 | 第40-42页 |
| 4．1．1 总RNA的提取与质量检测结果 | 第40页 |
| 4．1．2 RT-PCR扩增的结果 | 第40页 |
| 4．1．3 猪Sar1b基因cDNA序列分析结果 | 第40-42页 |
| 4．2 猪Sar1b基因的染色体定位结果 | 第42-45页 |
| 4．2．1 染色体区域定位结果 | 第42-44页 |
| 4．3．2 精细定位结果 | 第44-45页 |
| 4．3 猪Sar1b基因的组织表达结果 | 第45-47页 |
| 4．4 猪Sar1b基因的遗传多态性检测结果 | 第47-49页 |
| 4．4．1 检测片段的PCR扩增 | 第47页 |
| 4．4．2 SSCP检测遗传变异 | 第47-48页 |
| 4．4．3 Sar1b基因在不同猪群中的多态性分析结果 | 第48-49页 |
| 4．5 猪Sar1b基因的缺失突变位点与部分经济性状的关联分析结果 | 第49-51页 |
| 4．6 猪Sar1b基因的原核表达结果 | 第51-56页 |
| 4．6．1 RT-PCR扩增结果 | 第51页 |
| 4．6．2 猪Sar1b基因重组原核表达载体的构建 | 第51页 |
| 4．6．3 原核表达载体pET28a-Sar1b的鉴定 | 第51-54页 |
| 4．6．3．1 重组子的菌液PCR鉴定结果 | 第51页 |
| 4．6．3．2 重组子的酶切鉴定结果 | 第51-53页 |
| 4．6．3．4 重组子中的插入基因片断的测序鉴定结果 | 第53-54页 |
| 4．6．4 IPTG诱导重组原核表达载体表达Sar1b蛋白 | 第54-55页 |
| 4．6．5 Sar1b基因原核表达蛋白的Western-blot检测结果 | 第55-56页 |
| 5 讨论 | 第56-61页 |
| 5．1 关于候选基因法及候选基因的选取 | 第56页 |
| 5．2 关于Sar1b基因的物理定位 | 第56-58页 |
| 5．3 关于Sar1b基因的组织表达谱 | 第58页 |
| 5．4 关于Sar1b基因的多态性检测及性状关联分析 | 第58-61页 |
| 6 小结 | 第61-63页 |
| 6．1 本研究获得的结果 | 第61页 |
| 6．2 本研究的创新点 | 第61页 |
| 6．3 本研究不足之处及下一步值得研究的工作 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录1 缩略词表 | 第68-69页 |
| 附录2 猪Sar1b基因第5内含子序列 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
