| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述及研究思路 | 第12-24页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| ·拷贝数变异(CNVs)研究现状 | 第12-13页 |
| ·甘草酸生物合成途径研究进展 | 第13-14页 |
| ·外源基因表达系统的研究现状 | 第14-17页 |
| ·研究方法综述 | 第17-19页 |
| 2 研究思路与方法 | 第19-24页 |
| ·研究目标 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| ·研究方案 | 第20-24页 |
| 第二章 甘草HMGR、SQS和β-AS基因毕赤酵母表达载体的构建 | 第24-40页 |
| ·实验材料、试剂和仪器 | 第24页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·带酶切位点的基因片段的获得 | 第25-28页 |
| ·表达载体和基因片段的双酶切 | 第28-29页 |
| ·表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·实验结果 | 第32-38页 |
| ·带酶切位点的基因片段的获得 | 第32-34页 |
| ·基因片段和空表达载体的双酶切结果 | 第34-35页 |
| ·基因片段和空表达载体的连接结果 | 第35-37页 |
| ·重组质粒的提取结果 | 第37-38页 |
| ·小结与讨论 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 含甘草HMGR、SQS和β-AS基因的工程菌的构建 | 第40-54页 |
| ·实验材料、试剂及仪器 | 第40页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第40-42页 |
| ·实验方法 | 第42-47页 |
| ·表达载体pPIC9K线性化酶切位点分析 | 第42页 |
| ·重组质粒线性化及回收 | 第42-43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·重组质粒转化感受态GS115 | 第43-44页 |
| ·含甘草HMGR、SQS和β-AS基因毕赤酵母菌株初筛 | 第44-47页 |
| ·实验结果 | 第47-52页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第47-48页 |
| ·G418遗传霉素抗性筛选 | 第48页 |
| ·Mut+转化子的筛选 | 第48-49页 |
| ·单克隆快速PCR鉴定 | 第49页 |
| ·蛋白诱导表达检测 | 第49-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-54页 |
| ·小结 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 Real time PCR体系的建立及含甘草HMGR、SQS和β-AS基因工程菌的拷贝数检测 | 第54-70页 |
| ·实验材料、试剂及仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-60页 |
| ·总DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·内参基因的确定 | 第55页 |
| ·质粒标准品的构建 | 第55-57页 |
| ·HMGR、SQS、β-AS及GAP基因实时荧光定量PCR引物的设计 | 第57-58页 |
| ·Real time PCR体系标准曲线的建立 | 第58页 |
| ·Real time PCR扩增 | 第58-60页 |
| ·实验结果 | 第60-67页 |
| ·总DNA提取 | 第60页 |
| ·菌液(含质粒标准品)的鉴定 | 第60-61页 |
| ·标准曲线的建立 | 第61-63页 |
| ·Real time PCR引物特异性检验 | 第63-65页 |
| ·各菌株Real time PCR扩增 | 第65-67页 |
| ·小结与讨论 | 第67-70页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 含有甘草HMGR、SQS和β-AS基因不同拷贝数的毕赤酵母的基因表达分析 | 第70-80页 |
| ·实验材料、试剂及仪器 | 第70页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第70-71页 |
| ·溶液配制 | 第70页 |
| ·培养基配制 | 第70-71页 |
| ·实验方法 | 第71-73页 |
| ·含不同拷贝数菌株的诱导表达 | 第71页 |
| ·不同拷贝数菌株基因表达量检测 | 第71-73页 |
| ·实验结果 | 第73-79页 |
| ·RNA提取 | 第73-74页 |
| ·半定量循环数的确定 | 第74-76页 |
| ·光密度扫描定量 | 第76-79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-80页 |
| ·小结 | 第79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| 第六章 总结与展望 | 第80-82页 |
| ·总结 | 第80页 |
| ·展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-86页 |
| 附录 | 第86-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 个人简历 | 第96页 |
