| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| Ⅰ 引言 | 第12-15页 |
| Ⅱ 结核病的免疫预防及新型疫苗研究进展(文献综述) | 第15-31页 |
| 1 核病的免疫预防史回顾 | 第15-19页 |
| 2 BCG预防结核病的成效及存在的问题 | 第19-20页 |
| 3 流行病学形势及对新型高效制剂的要求 | 第20-21页 |
| 4 结核病新型疫苗的研究进展 | 第21-29页 |
| 5 DNA疫苗研究存在的误区 | 第29页 |
| 6 研发前景及展望 | 第29-31页 |
| Ⅲ 表达结核菌抗原真核表达载体构建、鉴定 | 第31-73页 |
| 1 材料与方法 | 第31-58页 |
| ·结核菌H37Rv标准株(ATCC27294) | 第31页 |
| ·L-J培养基配方及配制方法 | 第31页 |
| ·结核菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·转化细菌质粒DNA的提取(供PCR用) | 第31-32页 |
| ·PCR试剂等 | 第32页 |
| ·pVAX1真核表达载体 | 第32页 |
| ·大肠埃希氏菌(Escherichia coli)DH5 α及JM109菌株 | 第32页 |
| ·pGex-2T载体 | 第32页 |
| ·Ex Taq DNA酶 | 第32页 |
| ·PCR反应体系 | 第32页 |
| ·PCR扩增程序 | 第32-33页 |
| ·基因扩增仪 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·PCR片段的回收 | 第33-34页 |
| ·回收的PCR片段与T-载体连接 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒转化感受态细胞 | 第35页 |
| ·建立测序克隆载体的主要步骤 | 第35-36页 |
| ·构建的真核表达载体的基因测序分析 | 第36-38页 |
| ·质粒载体或中间载体的DNA序列分析 | 第38页 |
| ·本研究中所构建的DNA疫苗代码 | 第38页 |
| ·hIL-2基因 | 第38-40页 |
| ·表达结核菌Mtb8.4蛋白的真核表达载体(TB-V1)构建过程 | 第40-42页 |
| ·表达结核菌Ag85B蛋白真核表达载体(TB-V2)构建过程 | 第42-43页 |
| ·表达结核菌Mtb8.4、38kDa的CTL表位和Ag85B融合蛋白的真核表达载体(TB-V3)的构建步骤 | 第43-45页 |
| ·表达GST-MTB8.4融合蛋白真核表达载体(113-V4)的构建过程 | 第45-46页 |
| ·表达GST-Ag85B融合蛋白真核表达载体(TB-V5)的构建步骤 | 第46-47页 |
| ·p-IL2s质粒载体的构建 | 第47-48页 |
| ·TB-V6疫苗的结构及构建过程 | 第48-49页 |
| ·TB-V7 DNA疫苗的基因结构及构建 | 第49-50页 |
| ·TB-V8 DNA疫苗的结构及构建步骤 | 第50-51页 |
| ·TB-V9 DNA疫苗的构建过程 | 第51-53页 |
| ·TB-V10 DNA疫苗构建 | 第53-55页 |
| ·表达人白细胞介素-2的真核表达载体(p-hIL2)的构建 | 第55-58页 |
| 2 结果 | 第58-66页 |
| ·TB-V1质粒表达载体的构建结果 | 第58页 |
| ·TB-V2质粒表达载体的构建结果 | 第58-59页 |
| ·TB-V3质粒表达载体的构建结果 | 第59-60页 |
| ·TB-V4质粒表达载体的构建结果 | 第60-61页 |
| ·TB-V5质粒表达载体的构建结果 | 第61页 |
| ·TB-V7表达载体的构建的结果 | 第61-62页 |
| ·TB-V6真核表达载体的结果 | 第62-63页 |
| ·TB-V8的真核表达载体构建的结果 | 第63-64页 |
| ·TB-V9疫苗构建结果 | 第64页 |
| ·TB-V10的构建结果 | 第64-65页 |
| ·p-hIL2质粒的构建结果 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-73页 |
| Ⅳ 结核DNA疫苗免疫小鼠的脾淋巴细胞产生细胞因子水平观察 | 第73-89页 |
| 1 材料与方法 | 第73-77页 |
| ·结核DNA疫苗的制备 | 第73-74页 |
| ·质粒DNA制备、提取和纯化等有关试剂配制 | 第74-75页 |
| ·主要试验材料 | 第75页 |
| ·细胞因子检测方法 | 第75-76页 |
| ·培养基上清中鼠白细胞介素-2的测定 | 第76页 |
| ·mIL-10的定量测定方法 | 第76页 |
| ·mIL-6的定量检测 | 第76页 |
| ·鼠干扰素(interferon-γ，mIFN-γ)的测定 | 第76页 |
| ·C57BL／6的免疫程序 | 第76-77页 |
| ·BCG | 第77页 |
| 2 结果 | 第77-85页 |
| ·5种细胞因子标准曲线的直线回归方程、相关系数及其显著性检验 | 第77-78页 |
| ·5种DNA疫苗免疫或者联合免疫组的小鼠产生的hIL-2的水平比较 | 第78页 |
| ·5种DNA疫苗免疫或者联合免疫的小鼠脾细胞体外产生的mIFN-γ的水平比较 | 第78-79页 |
| ·5种DNA疫苗免疫或者联合免疫的小鼠的脾细胞体外产生的mIL-2的水平比较 | 第79-80页 |
| ·5种DNA疫苗免疫组或者联合免疫组小鼠的脾细胞体外产生的mIL-6水平比较 | 第80页 |
| ·5种结核DNA疫苗免疫组或联合免疫组C57BL／6小鼠的脾淋巴细胞产mIL-10的水平 | 第80-81页 |
| ·TB-V6(表达结核菌Mtb8.4蛋白的DNA疫苗)免疫小鼠的细胞因子水平 | 第81页 |
| ·TB-V7免疫组产生的细胞因子比较 | 第81-82页 |
| ·TB-V8免疫组产生的细胞因子水平 | 第82页 |
| ·TB-V9 DNA疫苗免疫组mIL-2产生的水平 | 第82-83页 |
| ·TB-V10 DNA疫苗免疫组mIL-2产生的水平 | 第83页 |
| ·p-hIL2真核表达载体注射C57BL／6小鼠的脾淋巴细胞产生细胞因子情况和血清中hIL-2水平 | 第83-84页 |
| ·p-hIL2与TB-V7联合免疫的细胞因子变化 | 第84页 |
| ·p-hIL2与TB-V6联合免疫的细胞因子水平变化 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-89页 |
| Ⅴ 结核DNA疫苗免疫小鼠抵抗结核菌H_(37)Rv株攻击的实验观察 | 第89-100页 |
| 1 材料与方法 | 第89-90页 |
| 2 结果 | 第90-96页 |
| ·构建的5种结核菌DNA疫苗保护免疫小鼠的作用比较 | 第90页 |
| ·以Mtb8.4为主要表达抗原的TB DNA疫苗的免疫效果 | 第90-91页 |
| ·以结核菌Ag85B为主要抗原的DNA疫苗的免疫保护作用 | 第91页 |
| ·表达hIL-2的真核表达载体及其与其他DNA疫苗的联合免疫保护效果比较 | 第91-92页 |
| ·结核DNA疫苗免疫鼠脾淋巴细胞体外产生的细胞因子的含量与疫苗免疫后抵抗结核菌H37Rv侵袭的关系 | 第92-93页 |
| ·小鼠肝脏和脾脏结核菌载量 | 第93页 |
| ·12个免疫或对照组结核菌菌落图片 | 第93-96页 |
| 3 讨论 | 第96-100页 |
| ·目前已有结核DNA疫苗的免疫效果简单回顾 | 第96-97页 |
| ·BCG免疫存在的主要问题及疫苗研究发展的方向 | 第97页 |
| ·实验的5种疫苗的保护作用评价 | 第97页 |
| ·表达融合抗原的免疫效果 | 第97-98页 |
| ·与表达细胞因子的载体联合免疫策略 | 第98页 |
| ·细胞因子水平与保护力之间的关系 | 第98-99页 |
| ·该研究的价值 | 第99-100页 |
| Ⅵ 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 附录 本文涉及的缩写及术语简表 | 第111-113页 |
