| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 1 文献综述 | 第7-18页 |
| ·病毒的发现过程 | 第7-8页 |
| ·病毒特性 | 第8-9页 |
| ·病毒的理化性质 | 第8页 |
| ·病毒的增殖 | 第8-9页 |
| ·PCV分子生物学研究进展 | 第9-12页 |
| ·PCV基因组分子结构 | 第9页 |
| ·PCV转录模式 | 第9-11页 |
| ·PCV-1转录模式 | 第9-11页 |
| ·PCV-2转录模式 | 第11页 |
| ·主要结构基因ORF2研究进展 | 第11-12页 |
| ·PCV流行病学 | 第12-16页 |
| ·病毒来源与分布 | 第12-13页 |
| ·临床症状与病理损伤 | 第13-14页 |
| ·宿主范围和传播方式 | 第14-15页 |
| ·动物模型的研究 | 第15-16页 |
| ·PCV-2致病机理 | 第16页 |
| ·诊断方法研究 | 第16-17页 |
| ·免疫预防 | 第17页 |
| ·潜在的公共卫生意义 | 第17-18页 |
| 2 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·细胞、菌株、载体及病料 | 第19页 |
| ·酶及其它试剂 | 第19页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-27页 |
| ·病料PCR反应模板的制备 | 第20-21页 |
| ·PCR反应 | 第21页 |
| ·PCR产物的回收 | 第21-22页 |
| ·PCR产物克隆至T载体 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·质粒的少量制备 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的鉴定和序列测定 | 第23页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第23-24页 |
| ·脂质体介导基因组DNA转染真核细胞和间接免疫荧光试验 | 第24页 |
| ·PCV-2分子克隆的构建 | 第24页 |
| ·脂质体介导PCV-2分子克隆转染真核细胞及间接免疫荧光试验 | 第24页 |
| ·PCV-2 ORF1的克隆 | 第24-25页 |
| ·原核表达克隆构建 | 第25页 |
| ·ORF1基因诱导表达 | 第25页 |
| ·包涵体制备 | 第25-26页 |
| ·Western印迹鉴定表达产物 | 第26-27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-34页 |
| ·PCV-2全基因组的PCR扩增及PCR产物的克隆 | 第27页 |
| ·序列分析 | 第27-29页 |
| ·间接免疫荧光试验 | 第29页 |
| ·PCV-2 QD毒株基因组的结构分析 | 第29-30页 |
| ·PCV-2分子克隆的构建和鉴定 | 第30-32页 |
| ·ORF1的PCR扩增与序列鉴定 | 第32页 |
| ·ORF1基因在E.coli中表达和包涵体的提取 | 第32-34页 |
| 5 讨论 | 第34-38页 |
| ·病毒分离 | 第34页 |
| ·引物设计 | 第34页 |
| ·PCV-2进化分析 | 第34-35页 |
| ·与病毒毒力相关基因预测 | 第35页 |
| ·PCV-2基因组感染性的鉴定 | 第35-36页 |
| ·PCV-2感染性克隆的构建策略 | 第36页 |
| ·PCV-2 ORF1功能预测 | 第36页 |
| ·PCV-2 ORF1表达研究 | 第36-37页 |
| ·诊断、预防研究 | 第37-38页 |
| 6 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 附录 | 第47页 |
