| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一部分 综述 | 第8-18页 |
| 一、 巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第8-11页 |
| 1 、 Pichia pastoris的宿主 | 第8页 |
| 2 、 Pichia pastoris的表达载体 | 第8-10页 |
| 3 、 分泌表达的影响因素 | 第10-11页 |
| 4 、 Pichia pastons的表达系统的展望 | 第11页 |
| 二、 白细胞介素的概述 | 第11-16页 |
| 1 、 白细胞介素2 | 第11-15页 |
| 2 、 牛白细胞介素2的研究进展 | 第15-16页 |
| 三、 研究目的、方法及结果 | 第16-18页 |
| 1 、 研究目的 | 第16页 |
| 2 、 研究方法 | 第16-17页 |
| 3 、 研究结果 | 第17-18页 |
| 第二部分 实验内容 | 第18-55页 |
| 第一章 牛白细胞介素-2重组表达载体的构建及重组毕赤酵母的获得 | 第18-31页 |
| 一、 实验材料 | 第18-19页 |
| 二、 实验方法 | 第19-26页 |
| 1 、 试剂配制 | 第19页 |
| 2 、 重组牛白介素2表达载体的构建 | 第19-23页 |
| 3 、 宿主菌的转化 | 第23-26页 |
| 三、 实验结果 | 第26-28页 |
| 1 、 重组表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2 、 重组酵母菌株的转化 | 第27-28页 |
| 四、 讨论 | 第28-31页 |
| 第二章 牛白细胞介素2基因在毕赤酵母中的表达 | 第31-41页 |
| 一、 实验材料 | 第31-32页 |
| 二、 实验方法 | 第32-37页 |
| 1 、 试剂的配制 | 第32-34页 |
| 2 、 重组菌株的诱导表达 | 第34-35页 |
| 3 、 融合蛋白的过柱纯化 | 第35-36页 |
| 4 、 生物活性测定 | 第36-37页 |
| 三、 实验结果 | 第37-38页 |
| 1 、 重组菌株上清中目的蛋白的检测 | 第37页 |
| 2 、 重组菌株菌体蛋白的检测 | 第37页 |
| 3 、 融合蛋白的纯化 | 第37页 |
| 4 、 融合蛋白生物活性的检测 | 第37-38页 |
| 四、 讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 影响目的蛋白有效分泌原因的研究 | 第41-55页 |
| 一、 实验材料 | 第41-42页 |
| 二、 实验方法 | 第42-50页 |
| 1 、 天然信号肽表达载体的构建 | 第42-46页 |
| 2 、 以α-factor为信号肽保留Glu-Ala的表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 3 、 重组酵母菌株的获得与鉴定 | 第49页 |
| 4 、 两种重组菌株的诱导表达 | 第49-50页 |
| 三、 实验结果 | 第50-52页 |
| 1 、 连续延伸PCR方法获得带有天然信号肽NS的基因 | 第50页 |
| 2 、 不同信号肽表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3 、 重组酵母菌株的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| 4 、 高抗性重组菌株的诱导表达与检测 | 第52页 |
| 四、 讨论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录 测序报告 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
