| 第一章 文献综述 | 第1-23页 |
| ·引言 | 第11-12页 |
| ·粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)概述 | 第12-20页 |
| ·GM-CSF生物学功能 | 第12-14页 |
| ·GM-CSF的结构和理化性质 | 第13页 |
| ·GM-CSF的生物学功能 | 第13页 |
| ·临床应用 | 第13-14页 |
| ·GM-CSF研究进展 | 第14-20页 |
| ·hGM-CSF基因的克隆和表达 | 第14-15页 |
| ·rhGM-CSF的复性及分离纯化 | 第15-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 第二章 人GM-CSF基因的突变及克隆 | 第23-36页 |
| ·前言 | 第23-24页 |
| ·实验部分 | 第24-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·仪器与设备 | 第24页 |
| ·DNA操作中的主要试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·方法与步骤 | 第25-27页 |
| ·人GM-CSF基因的扩增与回收 | 第25-26页 |
| ·人GM-CSF基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·重组质粒pMD18-T／rhGM-CSF的提取 | 第27页 |
| ·重组质粒pMD18-T／rhGM-CSF的鉴定 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-34页 |
| ·人GM-CSF基因片段的获得 | 第27-29页 |
| ·人GM-CSF基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·人GM-CSF基因的鉴定 | 第30-34页 |
| ·小结 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-36页 |
| 第三章 人GM-CSF表达质粒的构建及在大肠杆菌中的高效表达 | 第36-46页 |
| ·前言 | 第36-38页 |
| ·外源基因在原核细胞中表达的重要调控元件 | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌表达系统的问题 | 第37-38页 |
| ·实验部分 | 第38-39页 |
| ·质粒与细菌 | 第38页 |
| ·工具酶及试剂 | 第38页 |
| ·仪器与设备 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·人GM-CSF成熟区在大肠杆菌中的表达 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第39-41页 |
| ·载体的选择 | 第39-40页 |
| ·限制性内切酶运用的设计 | 第40页 |
| ·人GM-CSF基因与载体的连接 | 第40-41页 |
| ·重组质粒pDH／rhGM-CSF的筛选与鉴定 | 第41-44页 |
| ·利用宿主细胞遗传表型的改变进行筛选 | 第41-42页 |
| ·重组表达质粒pDH／rhGM-CSF的PCR鉴定 | 第42页 |
| ·重组表达质粒pDH／rhGM-CSF的酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pDH／rhGM-CSF的序列分析 | 第43-44页 |
| ·重组人GM-CSF的表达 | 第44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| 第四章 大肠杆菌生产rhGM-CSF的摇瓶发酵工艺研究 | 第46-59页 |
| ·前言 | 第46-48页 |
| ·培养基 | 第46页 |
| ·培养条件的影响 | 第46-48页 |
| ·实验部分 | 第48-51页 |
| ·菌株与主要试剂 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·试剂的配制 | 第48-50页 |
| ·培养方法 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·培养基种类对rhGM-CSF表达的影响 | 第51-52页 |
| ·培养温度对工程菌生长的影响 | 第52页 |
| ·诱导时机对工程菌生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第52-53页 |
| ·诱导表达时间对工程菌生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第53-54页 |
| ·pH值对工程菌生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第54-55页 |
| ·接种量对工程菌生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第55页 |
| ·摇床转速对菌体生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第55-56页 |
| ·种子菌龄对工程菌生长和rhGM-CSF表达的影响 | 第56页 |
| ·优化条件下大肠杆菌DH5α／pDH／rhSCF的培养 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-59页 |
| 第五章 离子交换色谱法对重组人GM-CSF的复性与同时纯化 | 第59-68页 |
| ·前言 | 第59页 |
| ·试验部分 | 第59-62页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·重组人GM-CSF的抽提 | 第60-61页 |
| ·Bradford法测定蛋白含量 | 第61页 |
| ·用离子交换色谱法分离纯化rhGM-CSF | 第61-62页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和质量回收率的测定 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-66页 |
| ·流动相组成对rhGM-CSF分离纯化的影响 | 第62-64页 |
| ·离子交换简易型色谱柱对重组人GM-CSF复性及同时纯化 | 第64-65页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及质量回收率检测 | 第65-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
