| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 一. 文献综述 | 第11-32页 |
| ·稻瘟病与稻瘟病菌 | 第11-15页 |
| ·稻瘟病菌的生活史、病害循环 | 第11-12页 |
| ·稻瘟病菌是丝状病原真菌分子生物学研究的模式 | 第12-15页 |
| ·真菌致病相关基因的克隆 | 第15-27页 |
| ·转化是研究致病相关基因的有效工具 | 第16-23页 |
| ·丝状真菌的整合转化 | 第16页 |
| ·限制酶介导的插入突变技术(Restriction enzyme-mediated insertional mutagenesis，REMI) | 第16-18页 |
| ·农杆菌介导转化技术(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation，ATMT) | 第18-20页 |
| ·转座子标签技术(Tansposon tagging) | 第20-21页 |
| ·目标突变技术(Targeted mutagnesis) | 第21-23页 |
| ·差异表达筛选(Differential cDNA screens) | 第23页 |
| ·表达序列标签(Expression sequence tag，EST) | 第23-24页 |
| ·基因表达系列分析法(Serial analysis of gene expression，SAGE) | 第24-25页 |
| ·抑制消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization，SSH) | 第25页 |
| ·基因芯片技术(Gene chip) | 第25-27页 |
| ·基因陷阱技术(Gene-trap) | 第27-31页 |
| ·研究背景 | 第27-28页 |
| ·基因陷阱的原理 | 第28-30页 |
| ·基因陷阱的特点 | 第30页 |
| ·启动子陷阱技术 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第31-32页 |
| 二. 材料与方法 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第32页 |
| ·培养基的配制 | 第32-33页 |
| ·载体的构建 | 第33-37页 |
| ·提取质粒 | 第33页 |
| ·CTAB法提取质粒 | 第33-34页 |
| ·质粒酶切 | 第34页 |
| ·DNA的琼脂糖电泳 | 第34页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第34-35页 |
| ·酶切片段的去磷酸化(CIP)处理 | 第35页 |
| ·连接反应 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第36-37页 |
| ·PCR反应 | 第37页 |
| ·原生质体的制备与转化 | 第37-39页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第37-38页 |
| ·稻瘟病菌转化 | 第38-39页 |
| ·突变体的表型分析 | 第39-40页 |
| ·荧光表达的观察 | 第39页 |
| ·生长速度的比较以及产孢量的比较 | 第39-40页 |
| ·附着胞形成的比较 | 第40页 |
| ·致病性测定 | 第40页 |
| ·Southern杂交分析 | 第40-43页 |
| ·CTAB法抽提突变体DNA | 第40-41页 |
| ·Southern转移 | 第41页 |
| ·DNA探针制备 | 第41-42页 |
| ·Southern杂交 | 第42页 |
| ·免疫检测 | 第42-43页 |
| 三. 结果与分析 | 第43-62页 |
| ·构建启动子陷阱质粒 | 第43-47页 |
| ·pEGFP-HPH的构建 | 第43-44页 |
| ·pCB1003-EGFP的构建 | 第44页 |
| ·重组质粒的验证 | 第44-46页 |
| ·质粒浓度测定 | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第47-49页 |
| ·方法的选择 | 第47-48页 |
| ·酶及酶浓度的的选择 | 第48页 |
| ·酶解时间的选择 | 第48-49页 |
| ·突变体的检测 | 第49-52页 |
| ·突变体插入稳定性检测 | 第50页 |
| ·PCR检测 | 第50-51页 |
| ·Southern杂交分析 | 第51-52页 |
| ·突变体表型分析 | 第52-59页 |
| ·生长速度减慢的突变体 | 第52-54页 |
| ·菌丝白色的突变体 | 第54页 |
| ·产孢减少的突变体 | 第54-56页 |
| ·与致病性相关的突变体 | 第56-59页 |
| ·典型突变体分析 | 第59-62页 |
| ·突变体KpnⅠ-12 | 第59-61页 |
| ·突变体SacⅠ-88 | 第61-62页 |
| 四. 总结与讨论 | 第62-65页 |
| ·总结 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 五. 参考文献 | 第65-73页 |
