人乳铁蛋白cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 第一章 乳铁蛋白研究进展 | 第10-24页 |
| ·乳铁蛋白的结构和分布 | 第10-11页 |
| ·乳铁蛋白的结构 | 第10-11页 |
| ·乳铁蛋白的分布 | 第11页 |
| ·乳铁蛋白的生物学功能 | 第11-14页 |
| ·乳铁蛋白的抑菌和杀菌作用 | 第11页 |
| ·乳铁蛋白的抗病毒作用 | 第11-12页 |
| ·乳铁蛋白促进Fe~(3+)的吸收 | 第12页 |
| ·乳铁蛋白作为基因转录的活化剂 | 第12页 |
| ·乳铁蛋白抑制胆固醇的积累 | 第12-13页 |
| ·阻断脂肪氧化 | 第13页 |
| ·乳铁蛋白能促进体内有益微生物双歧杆菌的生长 | 第13页 |
| ·调节免疫 | 第13页 |
| ·抗真菌作用 | 第13页 |
| ·作为细胞生长因 | 第13页 |
| ·乳铁蛋白的抗癌作用 | 第13-14页 |
| ·避免刺激肠胃 | 第14页 |
| ·乳铁蛋白的结构与功能的关系 | 第14-16页 |
| ·LF与CD_(14) | 第14-15页 |
| ·LF中氨基酸残基的作用 | 第15-16页 |
| ·乳铁蛋白生物学活性的影响因素 | 第16页 |
| ·饱和程度的影响 | 第16页 |
| ·盐类作用 | 第16页 |
| ·pH和温度的影响 | 第16页 |
| ·抗体或其他免疫物质作用 | 第16页 |
| ·介质的作用 | 第16页 |
| ·乳铁蛋白异源表达研究 | 第16-18页 |
| ·酵母表达系统 | 第16-17页 |
| ·曲霉表达系统 | 第17页 |
| ·昆虫表达系统 | 第17页 |
| ·仓鼠肾细胞(BHK细胞)表达系统 | 第17页 |
| ·转基因植物表达系统 | 第17-18页 |
| ·转基因动物乳腺表达系统 | 第18页 |
| ·乳铁蛋白的应用前景 | 第18-19页 |
| ·功能食品研究概况 | 第19-22页 |
| ·功能性食品的定义 | 第19-20页 |
| ·功能性食品的分类 | 第20页 |
| ·功能性食品基料 | 第20-21页 |
| ·功能性食品应用前景 | 第21-22页 |
| ·结语 | 第22-24页 |
| 第二章 人乳铁蛋白cDNA克隆及序列测定 | 第24-45页 |
| ·材料与方法 | 第24-29页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·主要溶液及试剂 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·嗜中性粒细胞的分离 | 第25-26页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第26页 |
| ·RT-PCR合成人乳铁蛋白cDNA | 第26页 |
| ·PCR产物的加A反应 | 第26页 |
| ·DNA电泳及片段的回收和纯化 | 第26-27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·DNA片段的连接、转化 | 第27页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的小量提取 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第28页 |
| ·兔抗人乳铁蛋白抗体的制备 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-43页 |
| ·RT-PCR获得hLF cDNA | 第29页 |
| ·hLF基因在pGEM-T easy中的克隆 | 第29-31页 |
| ·人乳铁蛋白cDNA序列的测定及分析 | 第31-43页 |
| ·人乳铁蛋白cDNA序列的测定 | 第31-34页 |
| ·人乳铁蛋白cDNA序列同源性分析 | 第34-43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 hLF基因在甲醇酵母中的克隆与表达 | 第45-59页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·电转感受态的制备 | 第45页 |
| ·重组质粒的转化(电转法) | 第45-46页 |
| ·转化菌株表型的筛选 | 第46页 |
| ·转化子菌落的PCR检测 | 第46页 |
| ·多拷贝整合转化子的筛选 | 第46页 |
| ·表达菌株的诱导表达 | 第46页 |
| ·TCA沉淀蛋白 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE检测目的蛋白的表达 | 第47页 |
| ·ELISA检测目的蛋白的表达 | 第47-48页 |
| ·Western blot检测 | 第48页 |
| ·Dot blot检测 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-55页 |
| ·表达载体构建及鉴定 | 第49-51页 |
| ·毕赤酵母转化和阳性克隆的筛选 | 第51-53页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第53页 |
| ·ELISA检测 | 第53-54页 |
| ·Dot blot | 第54页 |
| ·Western blot | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 英文缩略语 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
