| 主要英文缩写词 | 第1-13页 |
| 中文摘要 | 第13-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第一篇 文献综述 | 第20-48页 |
| 第一章 木聚糖结构 | 第20-21页 |
| 1 化学结构 | 第20-21页 |
| 2 立体结构 | 第21页 |
| 第二章 微生物木聚糖酶分子研究进展 | 第21-45页 |
| 1 微生物木聚糖酶的多态性 | 第21-24页 |
| 2 木聚糖酶的分类 | 第24-26页 |
| 3 微生物产木聚糖酶的调控 | 第26-29页 |
| ·影响微生物产木聚糖酶的因素 | 第26页 |
| ·木聚糖酶的诱导 | 第26-27页 |
| ·木聚糖酶的分子水平调控 | 第27-29页 |
| 4 木聚糖酶的生化特性 | 第29-31页 |
| ·一般特性 | 第29-30页 |
| ·酶蛋白中的碳水化合物含量 | 第30页 |
| ·底物特异性 | 第30-31页 |
| 5 木聚糖酶基因克隆与表达 | 第31-34页 |
| ·基因克隆与异源表达 | 第31-33页 |
| ·基因克隆与同源表达 | 第33-34页 |
| 6 木聚糖酶分子结构 | 第34-40页 |
| ·一般结构 | 第34-35页 |
| ·结构域 | 第35-40页 |
| 7 木聚糖酶作用机理 | 第40-42页 |
| 8 木聚糖酶分子的进化 | 第42-43页 |
| 9 木聚糖酶分子的改造 | 第43-45页 |
| ·氨基酸修饰 | 第44页 |
| ·定点突变 | 第44-45页 |
| 第三章 木聚糖酶应用研究进展 | 第45-48页 |
| 1 木聚糖酶在饲料工业中的应用 | 第45-46页 |
| 2 木聚糖酶在造纸和制浆中应用 | 第46-47页 |
| 3 木聚糖酶在食品工业中应用 | 第47页 |
| 4 木聚糖酶在其它领域中应用 | 第47-48页 |
| 第二篇 产木聚糖酶微生物的筛选和部分酶学特性 | 第48-55页 |
| 第四章 产木聚糖酶微生物的筛选和部分酶学特性 | 第48-55页 |
| 1 材料和方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·主要化学试剂的配制 | 第49页 |
| ·培养基和培养方法 | 第49-50页 |
| ·分析方法 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-53页 |
| ·不同微生物木聚糖酶水解RBB-木聚糖的透明圈 | 第51页 |
| ·不同微生物产生的木聚糖酶活性 | 第51-52页 |
| ·pH对不同微生物木聚糖酶的影响 | 第52-53页 |
| ·温度对不同微生物木聚糖酶的影响 | 第53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| 第三篇 不同微生物木聚糖酶基因克隆和序列分析 | 第55-100页 |
| 第五章 枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因克隆和序列分析 | 第56-70页 |
| 1 基因克隆策略 | 第56-57页 |
| 2 试验材料 | 第57-58页 |
| 3 试验方法 | 第58-62页 |
| ·基因组提取 | 第58-59页 |
| ·枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因克隆 | 第59页 |
| ·DNA电泳 | 第59页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第59-60页 |
| ·连接 | 第60页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第60-61页 |
| ·重组质粒提取与鉴定 | 第61页 |
| ·测序 | 第61-62页 |
| ·同源性比较 | 第62页 |
| 4 试验结果 | 第62-68页 |
| ·基因组提取 | 第62-63页 |
| ·TD-PCR结果 | 第63页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第63页 |
| ·核苷酸序列分析及其与其它来源木聚糖酶基因的同源性 | 第63-68页 |
| 5 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 环状芽孢杆菌木聚糖酶基因克隆和序列分析 | 第70-78页 |
| 1 基因克隆策略 | 第70-71页 |
| 2 试验材料 | 第71页 |
| 3 试验方法 | 第71-72页 |
| ·基因组提取 | 第71页 |
| ·基因组BamHI酶切 | 第71页 |
| ·环状芽孢杆菌木聚糖酶基因克隆 | 第71-72页 |
| ·DNA电泳 | 第72页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第72页 |
| ·连接 | 第72页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第72页 |
| ·重组质粒提取与鉴定 | 第72页 |
| ·测序 | 第72页 |
| ·同源性比较 | 第72页 |
| 4 试验结果 | 第72-76页 |
| ·基因组提取 | 第72-73页 |
| ·TD-PCR结果 | 第73页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第73页 |
| ·核苷酸序列分析及其与其它来源木聚糖酶基因的同源性 | 第73-76页 |
| 5 讨论 | 第76-78页 |
| 第七章 褐色高温单孢菌木聚糖酶基因克隆和序列分析 | 第78-88页 |
| 1 基因克隆策略 | 第78-79页 |
| 2 试验材料 | 第79页 |
| 3 试验方法 | 第79-80页 |
| ·基因组提取 | 第79页 |
| ·褐色高温单孢菌木聚糖酶基因克隆 | 第79-80页 |
| ·DNA电泳 | 第80页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第80页 |
| ·连接 | 第80页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第80页 |
| ·重组质粒提取与鉴定 | 第80页 |
| ·测序 | 第80页 |
| ·同源性比较 | 第80页 |
| 4 试验结果 | 第80-87页 |
| ·基因组提取 | 第80页 |
| ·TD-PCR结果 | 第80页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第80-81页 |
| ·核苷酸序列分析及其与其它来源木聚糖酶基因的同源性 | 第81-87页 |
| 5 讨论 | 第87-88页 |
| 第八章 黑曲霉木聚糖酶cDNA克隆和序列分析 | 第88-100页 |
| 1 cDNA克隆策略 | 第88-89页 |
| 2 试验材料 | 第89-90页 |
| 3 试验方法 | 第90-92页 |
| ·RNA提取 | 第90页 |
| ·反转录 | 第90-91页 |
| ·黑曲霉FS6木聚糖酶cDNA克隆 | 第91页 |
| ·DNA电泳 | 第91页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第91页 |
| ·连接 | 第91页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第91页 |
| ·重组质粒提取与鉴定 | 第91页 |
| ·测序 | 第91页 |
| ·同源性比较 | 第91-92页 |
| 4 试验结果 | 第92-99页 |
| ·RNA提取 | 第92页 |
| ·RT-PCR结果 | 第92页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第92页 |
| ·核苷酸序列分析及其与其它来源木聚糖酶基因的同源性 | 第92-99页 |
| 5 讨论 | 第99-100页 |
| 第四篇 不同微生物木聚糖酶基因表达 | 第100-125页 |
| 第九章 枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因表达 | 第101-108页 |
| 1 表达策略 | 第101-102页 |
| 2 试验材料 | 第102页 |
| 3 试验方法 | 第102-103页 |
| ·用于表达的枯草芽孢杆菌木聚糖酶基因PCR扩增 | 第102-103页 |
| ·割胶回收 | 第103页 |
| ·重组质粒酶切 | 第103页 |
| ·表达载体酶切 | 第103页 |
| ·连接 | 第103页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第103页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第103页 |
| ·RBB-木聚糖平板 | 第103页 |
| ·木聚糖酶基因阳性表达子的筛选 | 第103页 |
| 4 试验结果 | 第103-106页 |
| ·5’端含BamHI和3’端含XhoI限制性内切酶位点木聚糖酶全长基因的TD-PCR扩增 | 第103-104页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第104页 |
| ·含木聚糖酶基因重组克隆载体pGEM~(?)-T Easy BSXE Vector的BamHI和XhoI双酶切 | 第104页 |
| ·pET-30a(+)表达载体的BamHI和XhoI双酶切 | 第104页 |
| ·木聚糖酶基因与pET-30a(+)表达载体的连接和阳性重组子筛选 | 第104-106页 |
| ·木聚糖酶阳性表达子的筛选 | 第106页 |
| 5 讨论 | 第106-108页 |
| 第十章 褐色高温单孢菌木聚糖酶基因表达 | 第108-114页 |
| 1 表达策略 | 第108-109页 |
| 2 试验材料 | 第109页 |
| 3 试验方法 | 第109-110页 |
| ·用于表达的褐色高温单孢菌木聚糖酶基因PCR扩增 | 第109-110页 |
| ·割胶回收 | 第110页 |
| ·重组质粒酶切 | 第110页 |
| ·表达载体酶切 | 第110页 |
| ·连接 | 第110页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第110页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第110页 |
| ·RBB-木聚糖平板 | 第110页 |
| ·木聚糖酶基因阳性表达子的筛选 | 第110页 |
| 4 试验结果 | 第110-113页 |
| ·5’端含EcoRI和3’端含NotI限制性内切酶位点木聚糖酶全长基因的TD-PCR扩增 | 第110-111页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第111页 |
| ·含木聚糖酶基因重组克隆载体pGEM~(?)-T Easy TfxE Vector和pET-30a(+)表达载体的EcoRI和NotI双酶切 | 第111页 |
| ·木聚糖酶基因与pET-30a(+)表达载体的连接和阳性重组子筛选 | 第111-113页 |
| ·木聚糖酶阳性表达子的筛选 | 第113页 |
| 5 讨论 | 第113-114页 |
| 第十一章 黑曲霉木聚糖酶cDNA表达 | 第114-125页 |
| 1 表达策略 | 第114-115页 |
| 2 试验材料 | 第115-116页 |
| 3 试验方法 | 第116-119页 |
| ·用于表达的黑曲霉木聚糖酶cDNA拼接 | 第116-117页 |
| ·割胶回收 | 第117页 |
| ·重组质粒酶切 | 第117页 |
| ·表达载体酶切 | 第117页 |
| ·连接 | 第117页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第117页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第117页 |
| ·RBB-木聚糖平板 | 第117页 |
| ·木聚糖酶基因阳性表达子的筛选 | 第117页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第117-118页 |
| ·重组包涵体木聚糖酶的复性 | 第118-119页 |
| 4 试验结果 | 第119-123页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶cDNA片段AR1和AR2的TD-PCR扩增 | 第119页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶cDNA全长的拼接 | 第119页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第119-120页 |
| ·黑曲霉木聚糖酶拼接的全长cDNA序列分析 | 第120-121页 |
| ·含木聚糖酶cDNA重组克隆载体pGEM~(?)-T Easy ANXE Vector的NcoI和XhoI双酶切 | 第121-122页 |
| ·pET-30a(+)表达载体的NcoI和XhoI双酶切 | 第122页 |
| ·木聚糖酶cDNA与pET-30a(+)表达载体的连接和阳性表达子筛选 | 第122页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第122-123页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳 | 第123页 |
| ·重组包涵体木聚糖酶的复性 | 第123页 |
| 5 讨论 | 第123-125页 |
| 第五篇 不同重组木聚糖酶活性和酶学特性 | 第125-136页 |
| 第十二章 枯草芽孢杆菌源重组木聚糖酶活性和酶学特性 | 第126-131页 |
| 1 试验材料 | 第126页 |
| 2 试验方法 | 第126-127页 |
| ·基因工程菌培养 | 第126页 |
| ·木聚糖酶分离纯化 | 第126-127页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第127页 |
| ·木聚糖酶活性测定 | 第127页 |
| ·木聚糖酶特性分析 | 第127页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第127页 |
| 3 试验结果 | 第127-130页 |
| ·枯草芽孢杆菌源木聚糖酶基因工程菌的BSX酶活性 | 第127页 |
| ·木聚糖酶BSX的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第127-128页 |
| ·温度对木聚糖酶BSX活性的影响 | 第128-129页 |
| ·pH对木聚糖酶BSX活性的影响 | 第129页 |
| ·木聚糖酶BSX的热稳定性 | 第129-130页 |
| ·木聚糖酶BSX的pH稳定性 | 第130页 |
| 4 讨论 | 第130-131页 |
| 第十三章 褐色高温单孢菌源重组木聚糖酶活性和酶学特性 | 第131-136页 |
| 1 试验材料 | 第131页 |
| 2 试验方法 | 第131页 |
| ·基因工程菌培养 | 第131页 |
| ·木聚糖酶分离纯化 | 第131页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第131页 |
| ·木聚糖酶活性测定 | 第131页 |
| ·木聚糖酶特性分析 | 第131页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第131页 |
| 3 试验结果 | 第131-134页 |
| ·褐色高温单孢菌源木聚糖酶基因工程菌的BSX酶活性 | 第131-132页 |
| ·木聚糖酶Tfx的SDS-PAGE凝胶电泳 | 第132页 |
| ·温度对木聚糖酶Tfx活性的影响 | 第132页 |
| ·pH对木聚糖酶Tfx活性的影响 | 第132-133页 |
| ·木聚糖酶Tfx的热稳定性 | 第133页 |
| ·木聚糖酶Tfx的pH稳定性 | 第133-134页 |
| 4 讨论 | 第134-136页 |
| 第六篇 耐热木聚糖酶杂合基因构建、表达及其酶学特性 | 第136-160页 |
| 第十四章 耐热木聚糖酶杂合基因构建 | 第137-147页 |
| 1 杂合基因构建策略 | 第137-138页 |
| 2 试验材料 | 第138页 |
| 3 试验方法 | 第138-140页 |
| ·木聚糖酶基因片段的PCR扩增及杂合基因构建 | 第138-139页 |
| ·DNA电泳 | 第139页 |
| ·目的片段割胶回收 | 第139页 |
| ·连接 | 第139页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第139页 |
| ·重组质粒提取与鉴定 | 第139-140页 |
| ·测序 | 第140页 |
| ·同源性比较 | 第140页 |
| 4 试验结果 | 第140-145页 |
| ·杂合木聚糖酶分子的设计 | 第140页 |
| ·不同来源木聚糖酶基因片段的TD-PCR | 第140页 |
| ·木聚糖酶杂合基因的构建 | 第140页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第140-142页 |
| ·杂合基因核苷酸序列分析 | 第142-145页 |
| 5 讨论 | 第145-147页 |
| 第十五章 耐热木聚糖酶杂合基因表达 | 第147-152页 |
| 1 表达策略 | 第147-148页 |
| 2 试验材料 | 第148页 |
| 3 试验方法 | 第148-150页 |
| ·重组质粒的酶切 | 第148页 |
| ·表达载体的酶切 | 第148页 |
| ·割胶回收 | 第148页 |
| ·连接 | 第148-149页 |
| ·感受态细胞制备、转化以及阳性质粒的筛选 | 第149页 |
| ·杂合基因的TD-PCR鉴定 | 第149页 |
| ·阳性质粒的筛选 | 第149页 |
| ·RBB-木聚糖平板 | 第149页 |
| ·木聚糖酶杂合基因阳性表达子的筛选 | 第149-150页 |
| 4 试验结果 | 第150-151页 |
| ·含木聚糖酶杂合基因重组克隆载体pGEM~(?)-T Easy HX Vector的BamHI和XhoI双酶切 | 第150页 |
| ·pET-30a(+)表达载体的的BamHI和XhoI双酶切 | 第150页 |
| ·木聚糖酶杂合基因与pET-30a(+)表达载体的连接和阳性重组子筛选 | 第150-151页 |
| ·阳性表达子的筛选 | 第151页 |
| 5 讨论 | 第151-152页 |
| 第十六章 耐热杂合木聚糖酶活性和酶学特性 | 第152-160页 |
| 1 试验材料 | 第152页 |
| 2 试验方法 | 第152-153页 |
| ·基因工程菌培养 | 第152页 |
| ·木聚糖酶的分离纯化 | 第152-153页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第153页 |
| ·木聚糖酶活性测定 | 第153页 |
| ·木聚糖酶特性分析 | 第153页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第153页 |
| ·RBB-木聚糖酶平板和水解透明圈 | 第153页 |
| ·粘度测定 | 第153页 |
| 3 试验结果 | 第153-157页 |
| ·耐热木聚糖酶杂合基因工程菌的HX酶活性 | 第153页 |
| ·耐热木聚糖酶HX的表达量、分离纯化及其SDS-PAGE电泳 | 第153-154页 |
| ·温度对耐热杂合木聚糖酶HX活性的影响 | 第154-155页 |
| ·pH对耐热杂合木聚糖酶HX活性的影响 | 第155页 |
| ·耐热杂合木聚糖酶HX的热稳定性 | 第155页 |
| ·耐热杂合木聚糖酶HX的pH稳定性 | 第155-156页 |
| ·木聚糖酶Tfx、BSX和HX的水解效率比较 | 第156页 |
| ·木聚糖酶Tfx、BSX和HX对木聚糖粘度的影响 | 第156-157页 |
| 4 讨论 | 第157-160页 |
| 第七篇 总结和今后需进一步研究的问题 | 第160-164页 |
| 参考文献 | 第164-178页 |
| 附录一: pGEM~(?)-T Easy Vector物理图谱 | 第178-179页 |
| 附录二: pET-30a(+) vector物理图谱 | 第179-180页 |
| 致谢 | 第180-181页 |
| 附: 攻读博士学位期间获奖和发表的论文 | 第181页 |
