利用重组F26G实现呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化的研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 前 言 | 第6-17页 |
| 第一部分： 论文正文 | 第17-52页 |
| 一 方法 | 第17-26页 |
| 1．1 pET-22b-F26G表达载体的构建 | 第17-21页 |
| 1．1．1 F26G基因的获得 | 第17-18页 |
| 1．1．2 载体pET-22b的处理 | 第18-19页 |
| 1．1．3 将F26G基因片段连入pET-22b | 第19-20页 |
| 1．1．4 重组质粒导入大肠杆菌 | 第20-21页 |
| 1．2 表达产物的检测 | 第21-24页 |
| 1．2．1 总蛋白含量的测定（Lowry法） | 第21-22页 |
| 1．2．2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 1．2．3 表达产物F26G酶活性的检测 | 第23-24页 |
| 1．3 影响酶表达因素的考察 | 第24-25页 |
| 1．3．1 工程菌生长曲线 | 第24页 |
| 1．3．2 大肠杆菌菌株 | 第24页 |
| 1．3．3 诱导物加入时间 | 第24页 |
| 1．3．4 诱导时间 | 第24页 |
| 1．3．5 pH值、接种量、种龄 | 第24-25页 |
| 1．4 呋甾皂苷向螺甾皂苷的生物转化 | 第25-26页 |
| 1．4．1 纸层析定糖 | 第25页 |
| 1．4．2 转化产物的制备及纯化 | 第25-26页 |
| 二 结 果 | 第26-47页 |
| 2．1 pET-22b-F26G表达载体的构建 | 第26-30页 |
| 2．1．1 F26G基因的获得 | 第26-28页 |
| 2．1．2 载体pET-22b的处理 | 第28页 |
| 2．1．3 目的基因连入表达载体及重组子的筛选 | 第28-30页 |
| 2．2 表达产物的检测 | 第30-35页 |
| 2．2．1 总蛋白含量的测定（Lowry法） | 第30-31页 |
| 2．2．2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2．2．3 表达产物F26G酶活性的检测 | 第32-35页 |
| 2．3． 影响酶表达因素的考察 | 第35-39页 |
| 2．3．1 工程菌生长曲线 | 第35-36页 |
| 2．3．2 大肠杆菌菌株 | 第36-37页 |
| 2．3．3 诱导物加入时间 | 第37-38页 |
| 2．3．4 诱导时间 | 第38-39页 |
| 2．3．5 pH值、接种量、种龄 | 第39页 |
| 2．3．6 小结 | 第39页 |
| 2．4． 呋甾皂苷向螺甾皂苷的生物转化 | 第39-47页 |
| 2．4．1 酶对底物选择性的考察 | 第39-41页 |
| 2．4．2 F26G对底物催化能力的HPLC检测 | 第41-42页 |
| 2．4．3 转化产物的制备及结构鉴定 | 第42-46页 |
| 2．4．4 小结 | 第46-47页 |
| 三 讨 论 | 第47-51页 |
| 四 结 论 | 第51-52页 |
| 第二部分： 附录 | 第52-66页 |
| 实验材料 | 第53-57页 |
| 附 图 | 第57-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 致 谢 | 第68-69页 |
