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恶性疟原虫保护性抗原复合基因与人白细胞介素-2基因的重组、表达及其表达产物的鉴定

Acknowledgement第1-13页
Abstract (English)第13-15页
Abstract (Chinese)第15-17页
List of Figures/Table/Appendices第17-18页
Glossary of abbreviations第18-20页
CHAPTER 1: INTRODUCTION第20-24页
CHAPTER 2: MATERIAL AND METHODS第24-52页
 EXPERIMENT NO.1 RECOVERY OF TARGET DNA (PfCMR) FROM PLASMID PWR 450-1/PfCMR第24-30页
  a. Plasmid PWR450-1 PfCMR DNA extraction. Plasmid isolation:第24-26页
   Preparation of plasmid DNA第25-26页
  b. Restriction endonuclease digestion of plasmid DNA(PWR450-1)第26-27页
  c. Isolation and purification第27-30页
 EXPERIMENT NO. 2 EXTRACTION OF PLASMID pBV220/IL-2 DNA第30-32页
  a. DNA extraction第30-31页
  b. Endonuclease digestion (EcoR1)第31-32页
 EXPERIMENT NO. 3 LIGATION第32-36页
  a. Dephosphorylation of linearized plasmid DNA第32-33页
  b. Ligation of cohesive termini第33-34页
  c. Ligation of blunt-ended DNA第34-36页
 EXPERIMENT NO. 4 TRANSFORMATION第36-38页
  Preparation of competent Escherichia coli cells第36-37页
  Transformation reaction第37-38页
 EXPERIMENT NO. 5 CLONING第38-40页
  a. Screening of bacterial colonies (by PCR)第38-39页
  b.Analysis and identification of recombinants by restriction endonuclease digestion第39-40页
 EXPERIMENT NO. 6 EXPRESSION OF pBV220/PfCMR-IL-2/DH5a第40-41页
 EXPERIMENT NO. 7 ANALYSIS OF THE EXPRESSED PRODUCTS第41-44页
  Staining SDS-Polyacrylamide gels with coomassie brilliant blue R250第43页
  Drying SDS-polyacrylamide gels第43-44页
 EXPERIMENT NO.8 STUDY OF THE BIOLOGICAL AND IMMUNOLOGICAL ACTIVITY OF THE PURIFIED PRODUCTS第44-52页
  a. Detection of IL-2 by cytotoxic T lymphocyte line (CTLL/MTT)第44-45页
  b. Humoral immune response第45-52页
   1. Western blot第45-49页
    Ⅰ. Transfer of proteins from SDS polyacrylamide gels to solid support第46页
    Ⅱ. Blocking binding sites for immunoglobulins on the nitrocellulose filter第46-47页
    Ⅲ.Binding of the primary antibody to the target protein第47-49页
   2. Dot-ELISA第49-52页
    c. Cellular immune response第51-52页
CHAPTER.3: RESULTS第52-55页
 1. Isolation of plasmid DNA第52页
 2. Recovery of target DNA (PfCMR) fragment第52页
 3. Construction of the recombinant vector pBV220/PfCMR-IL-2第52-53页
  (1) Ligation and transformation第52页
  (2) Transformation第52-53页
  (3) Screening recombinants by PCR第53页
 4. Identification of positive recombinants by restriction endonuclease digestion第53页
 5. High level expression of pBV220/PfCMR-IL-2第53页
 6. Identification of the expressed protein第53-55页
  (1) Analysis by Western Blot第54页
  (2) Dot-ELISA Assay第54页
  (3) CTLL/MTT第54页
  (4) T lymphocyte transformation test第54-55页
FIGURES第55-66页
CHAPTER 4: DISCUSSION第66-71页
CHAPTER 5: SUMMARY(English)第71-73页
SUMMARY(Chinese)第73-74页
REFERENCES第74-82页
CHAPTER 6: LITERATURE REVIEW Progress in the development of malaria vaccine第82-90页
REFERENCES第90-103页
APPENDICES第103-111页

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