Acknowledgement | 第1-13页 |
Abstract (English) | 第13-15页 |
Abstract (Chinese) | 第15-17页 |
List of Figures/Table/Appendices | 第17-18页 |
Glossary of abbreviations | 第18-20页 |
CHAPTER 1: INTRODUCTION | 第20-24页 |
CHAPTER 2: MATERIAL AND METHODS | 第24-52页 |
EXPERIMENT NO.1 RECOVERY OF TARGET DNA (PfCMR) FROM PLASMID PWR 450-1/PfCMR | 第24-30页 |
a. Plasmid PWR450-1 PfCMR DNA extraction. Plasmid isolation: | 第24-26页 |
Preparation of plasmid DNA | 第25-26页 |
b. Restriction endonuclease digestion of plasmid DNA(PWR450-1) | 第26-27页 |
c. Isolation and purification | 第27-30页 |
EXPERIMENT NO. 2 EXTRACTION OF PLASMID pBV220/IL-2 DNA | 第30-32页 |
a. DNA extraction | 第30-31页 |
b. Endonuclease digestion (EcoR1) | 第31-32页 |
EXPERIMENT NO. 3 LIGATION | 第32-36页 |
a. Dephosphorylation of linearized plasmid DNA | 第32-33页 |
b. Ligation of cohesive termini | 第33-34页 |
c. Ligation of blunt-ended DNA | 第34-36页 |
EXPERIMENT NO. 4 TRANSFORMATION | 第36-38页 |
Preparation of competent Escherichia coli cells | 第36-37页 |
Transformation reaction | 第37-38页 |
EXPERIMENT NO. 5 CLONING | 第38-40页 |
a. Screening of bacterial colonies (by PCR) | 第38-39页 |
b.Analysis and identification of recombinants by restriction endonuclease digestion | 第39-40页 |
EXPERIMENT NO. 6 EXPRESSION OF pBV220/PfCMR-IL-2/DH5a | 第40-41页 |
EXPERIMENT NO. 7 ANALYSIS OF THE EXPRESSED PRODUCTS | 第41-44页 |
Staining SDS-Polyacrylamide gels with coomassie brilliant blue R250 | 第43页 |
Drying SDS-polyacrylamide gels | 第43-44页 |
EXPERIMENT NO.8 STUDY OF THE BIOLOGICAL AND IMMUNOLOGICAL ACTIVITY OF THE PURIFIED PRODUCTS | 第44-52页 |
a. Detection of IL-2 by cytotoxic T lymphocyte line (CTLL/MTT) | 第44-45页 |
b. Humoral immune response | 第45-52页 |
1. Western blot | 第45-49页 |
Ⅰ. Transfer of proteins from SDS polyacrylamide gels to solid support | 第46页 |
Ⅱ. Blocking binding sites for immunoglobulins on the nitrocellulose filter | 第46-47页 |
Ⅲ.Binding of the primary antibody to the target protein | 第47-49页 |
2. Dot-ELISA | 第49-52页 |
c. Cellular immune response | 第51-52页 |
CHAPTER.3: RESULTS | 第52-55页 |
1. Isolation of plasmid DNA | 第52页 |
2. Recovery of target DNA (PfCMR) fragment | 第52页 |
3. Construction of the recombinant vector pBV220/PfCMR-IL-2 | 第52-53页 |
(1) Ligation and transformation | 第52页 |
(2) Transformation | 第52-53页 |
(3) Screening recombinants by PCR | 第53页 |
4. Identification of positive recombinants by restriction endonuclease digestion | 第53页 |
5. High level expression of pBV220/PfCMR-IL-2 | 第53页 |
6. Identification of the expressed protein | 第53-55页 |
(1) Analysis by Western Blot | 第54页 |
(2) Dot-ELISA Assay | 第54页 |
(3) CTLL/MTT | 第54页 |
(4) T lymphocyte transformation test | 第54-55页 |
FIGURES | 第55-66页 |
CHAPTER 4: DISCUSSION | 第66-71页 |
CHAPTER 5: SUMMARY(English) | 第71-73页 |
SUMMARY(Chinese) | 第73-74页 |
REFERENCES | 第74-82页 |
CHAPTER 6: LITERATURE REVIEW Progress in the development of malaria vaccine | 第82-90页 |
REFERENCES | 第90-103页 |
APPENDICES | 第103-111页 |