| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 低温对植物的影响 | 第13-14页 |
| 1.2 AFPs的概述 | 第14-16页 |
| 1.2.1 AFPs的发现 | 第14页 |
| 1.2.2 AFPs的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.3 重结晶抑制蛋白IRI | 第15页 |
| 1.2.4 抗冻蛋白的应用与发展前景 | 第15-16页 |
| 1.3 启动子 | 第16-19页 |
| 1.3.1 启动子的概述 | 第16页 |
| 1.3.2 启动子的种类 | 第16-19页 |
| 1.3.2.1 组成型启动子 | 第17页 |
| 1.3.2.2 组织特异性表达启动子 | 第17-18页 |
| 1.3.2.3 诱导性启动子 | 第18页 |
| 1.3.2.4 人工合成启动子 | 第18-19页 |
| 1.3.3 顺式作用元件 | 第19页 |
| 1.4 茉莉酸甲酯(Jasmonic acid,MEJA) | 第19-21页 |
| 1.4.1 茉莉酸甲酯的介绍 | 第19-20页 |
| 1.4.2 冷调控相关基因 | 第20页 |
| 1.4.3 茉莉酸甲酯低温胁迫分子响应机制 | 第20-21页 |
| 1.5 启动子活性与功能验证方法 | 第21-25页 |
| 1.5.1 启动子活性与功能验证概述 | 第21-22页 |
| 1.5.2 生物信息学分析 | 第22页 |
| 1.5.3 瞬时表达分析 | 第22-24页 |
| 1.5.4 遗传转化分析 | 第24-25页 |
| 1.5.5 电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay EMSA) | 第25页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第25-26页 |
| 1.7 实验路线 | 第26-27页 |
| 第二章 强冬性小麦M808IRI基因的表达分析 | 第27-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 植物材料与处理 | 第27页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.1.2 材料培养 | 第27页 |
| 2.1.1.3 处理条件 | 第27页 |
| 2.1.2 实验试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.2.1 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2.2 实验仪器 | 第28页 |
| 2.1.3 前期准备工作 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.2 RNA产物检测 | 第28页 |
| 2.2.3 反转录合成第一条链cDNA | 第28-29页 |
| 2.2.4 cDNA检测 | 第29页 |
| 2.2.5 cDNA检测q PCR所用内参引物 | 第29-30页 |
| 2.2.5.1 PCR检测内参引物 | 第29页 |
| 2.2.5.2 PCR检测步骤 | 第29-30页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.2.6.1 实时荧光定量PCR特异性引物 | 第30-31页 |
| 2.2.6.2 实时荧光定量PCR步骤 | 第31页 |
| 2.2.6.3 结果计算 | 第31页 |
| 2.3 结果分析 | 第31-38页 |
| 2.3.1 植物组织总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.2 cDNA检测实时荧光定量PCR所用引物 | 第32-33页 |
| 2.3.2.1 cDNA检测 | 第32页 |
| 2.3.2.2 PCR检测内参引物 | 第32页 |
| 2.3.2.3 PCR检测IRI基因引物 | 第32-33页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR结果 | 第33-38页 |
| 2.3.3.1 4 ℃低温诱导下的表达分析 | 第33-35页 |
| 2.3.3.2 4 ℃-MEJA诱导下的表达分析 | 第35-36页 |
| 2.3.3.3 基因表达量综合分析 | 第36-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 第三章 烟草瞬时表达鉴定IRI基因启动子功能分析 | 第39-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第39页 |
| 3.1.1.1 植物材料选择 | 第39页 |
| 3.1.1.2 材料培养 | 第39页 |
| 3.1.2 菌体与克隆载体 | 第39页 |
| 3.1.3 实验试剂与仪器 | 第39-41页 |
| 3.1.3.1 实验试剂 | 第39页 |
| 3.1.3.2 实验溶液的配制 | 第39-41页 |
| 3.1.3.3 常用培养基的配制 | 第41页 |
| 3.1.3.4 实验仪器 | 第41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 重组质粒转入农杆菌感受态 | 第41-42页 |
| 3.2.1.1 感受态的制备 | 第41页 |
| 3.2.1.2 质粒的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.1.3 农杆菌的转化 | 第42页 |
| 3.2.2 农杆菌的转化的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 烟草侵染 | 第43页 |
| 3.2.3.1 烟草侵染处理 | 第43页 |
| 3.2.3.2 侵染后烟草的胁迫处理 | 第43页 |
| 3.2.4 烟草叶片GUS组织化学染色 | 第43-44页 |
| 3.2.5 烟草叶片脱色 | 第44页 |
| 3.3 结果分析 | 第44-52页 |
| 3.3.1 启动子中与胁迫激素相关顺式作用元件分析 | 第44-47页 |
| 3.3.2 重组质粒鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.2.1 质粒的提取 | 第47页 |
| 3.3.2.2 质粒回转农杆菌PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.3 农杆菌介导GUS报告基因的瞬时表达分析 | 第48-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 IRI启动子活性的稳定表达分析 | 第53-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 植物材料和处理 | 第53页 |
| 4.1.1.1 植物材料种植和培养 | 第53页 |
| 4.1.1.2 收种子 | 第53页 |
| 4.1.2 菌体与克隆载体 | 第53页 |
| 4.1.3 溶液的配制 | 第53-54页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第54页 |
| 4.2 实验方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 拟南芥的转化 | 第54页 |
| 4.2.1.1 农杆菌菌液的制备 | 第54页 |
| 4.2.1.2 拟南芥侵染转化 | 第54页 |
| 4.2.2 阳性种子筛选 | 第54页 |
| 4.2.3 拟南芥转基因阳性苗的鉴定 | 第54-55页 |
| 4.2.4 T_2代拟南芥转基因阳性苗胁迫处理 | 第55页 |
| 4.2.5 拟南芥转基因阳性苗GUS染色 | 第55页 |
| 4.3 结果分析 | 第55-58页 |
| 4.3.1 拟南芥转基因阳性苗鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.2 拟南芥转基因阳性苗GUS染色结果分析 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-61页 |
| 5.1 总结 | 第59页 |
| 5.2 研究展望 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
