| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-31页 |
| 1. 棉铃虫对拟除虫菊酯抗性 | 第11-14页 |
| ·棉铃虫对拟除虫菊酯抗性的发生概况 | 第11-12页 |
| ·棉铃虫对拟除虫菊酯的抗性机理 | 第12-14页 |
| ·表皮穿透速率降低 | 第12-13页 |
| ·神经敏感性下降 | 第13页 |
| ·解毒代谢作用增强 | 第13-14页 |
| 2. 细胞色素P450概况 | 第14-18页 |
| ·细胞色素P450的命名 | 第14-15页 |
| ·细胞色素P450的结构特征 | 第15页 |
| ·细胞色素P450的多样性 | 第15-16页 |
| ·细胞色素P450的遗传多态性 | 第16-17页 |
| ·细胞色素P450介导的昆虫抗药性机制 | 第17-18页 |
| 3 昆虫细胞色素P450基因表达调控机制 | 第18-26页 |
| ·真核生物基因表达调控概述 | 第18页 |
| ·基因转录水平的顺式作用元件 | 第18-21页 |
| ·核心启动子(Basal promoter) | 第19页 |
| ·启动子上游序列(Upstream promoter) | 第19页 |
| ·增强子(Enhancers) | 第19-20页 |
| ·绝缘子(Insulator) | 第20页 |
| ·时序与组织特异性调控序列(Tempor-control and tissue-specific regulatorysequence) | 第20页 |
| ·性别控制与同源异型盒(Sex-determination and the homebox) | 第20页 |
| ·反应元件(response elements) | 第20-21页 |
| ·基因转录水平调控的反式作用因子 | 第21-22页 |
| ·昆虫细胞色素P450基因的表达调控机制 | 第22-26页 |
| ·昆虫细胞色素P450基因的表达规律 | 第22页 |
| ·昆虫细胞色素P450基因的表达调控机制 | 第22-23页 |
| ·顺式元件调控 | 第23-24页 |
| ·反式作用因子调节 | 第24-25页 |
| ·顺式作用元件和反式作用因子共同调控 | 第25-26页 |
| ·转录后调控 | 第26页 |
| 4. 荧光素酶报告基因技术 | 第26-31页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统 | 第27-28页 |
| ·荧光素酶报告基因应用研究进展 | 第28-31页 |
| ·基因表达研究 | 第28页 |
| ·蛋白质间相互作用研究 | 第28页 |
| ·毒性物质检测研究 | 第28-29页 |
| ·RNA干扰研究 | 第29-31页 |
| 第二章 棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A12和CYP9A17v25’-调控区的克隆和序列分析 | 第31-43页 |
| 1. 材料和方法 | 第32-35页 |
| ·供试昆虫 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·棉铃虫YG、YGF品系DNA的提取 | 第32-33页 |
| ·引物设计及CYP9A12和CYP9A17v25’-调控区的PCR扩增、克隆和测序 | 第33-35页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第33-34页 |
| ·质粒载体的连接反应 | 第34页 |
| ·转化感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·细菌扩大培养 | 第35页 |
| ·目标片段检测 | 第35页 |
| 2 结果和分析 | 第35-40页 |
| ·目标片段的获得 | 第35页 |
| ·P450基因CYP9A12和CYP9A17v25’-调控区序列分析 | 第35-40页 |
| 3. 讨论 | 第40-43页 |
| 第三章 棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A17v2核心启动子区缺失分析 | 第43-55页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| ·供试昆虫 | 第44页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第44页 |
| ·CYP9A17v2基因系列缺失质粒的构建 | 第44-47页 |
| ·DNA提取 | 第44页 |
| ·CYP9A17v2基因系列缺失片段PCR扩增及产物纯化 | 第44-45页 |
| ·CYP9A17v2基因系列缺失片段与载体的连接、转化、筛选阳性克隆测序 | 第45页 |
| ·CYP9A17v2基因系列缺失质粒提取及酶切、测序检测 | 第45-47页 |
| ·草地贪夜蛾sf9细胞培养 | 第47-48页 |
| ·Grace's培养基的配制 | 第47页 |
| ·细胞的复苏和传代 | 第47页 |
| ·sf9细胞的冻存 | 第47-48页 |
| ·血细胞计数板计数 | 第48页 |
| ·sf9细胞的培养 | 第48页 |
| ·真核细胞转染实验 | 第48页 |
| ·双荧光素酶活性检测 | 第48-49页 |
| ·生物信息学分析 | 第49页 |
| 2. 结果与分析 | 第49-52页 |
| ·含CYP9A17v2基因5’-调控区系列缺失片段重组质粒的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| ·各转染质粒浓度及纯度检测结果 | 第50-51页 |
| ·CYP9A17v2基因5’调控区系列缺失片段的转录活性 | 第51-52页 |
| ·CYP9A17v2基因5’-调控区转录因子结合位点的预测 | 第52页 |
| 3. 讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 棉铃虫拟除虫菊酯抗性相关细胞色素P450基因多态性分析 | 第55-67页 |
| 1. 材料和方法 | 第56-58页 |
| ·供试昆虫 | 第56页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第56页 |
| ·总RNA提取及cDNA第一链合成 | 第56-57页 |
| ·棉铃虫总RNA提取 | 第56-57页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测总RNA | 第57页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第57页 |
| ·PCR扩增及产物的纯化、克隆与测序 | 第57-58页 |
| 2. 结果和分析 | 第58-64页 |
| ·目标片段的获得 | 第58页 |
| ·细胞色素P450基因CYP6B7多态性分析 | 第58-60页 |
| ·细胞色素P450基因CYP9A14多态性分析 | 第60-61页 |
| ·细胞色素P450基因CYP9A12多态性分析 | 第61-63页 |
| ·细胞色素P450基因CYP9A17v2多态性分析 | 第63-64页 |
| 3. 讨论 | 第64-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 附录:发表的学术论文 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
