| 摘要 | 第1-7页 |
| SUMMARY | 第7-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-41页 |
| ·稻瘟病概述 | 第15-18页 |
| ·稻瘟病与稻瘟病菌 | 第15页 |
| ·稻瘟病的发病规律 | 第15-16页 |
| ·稻瘟病菌的生活史 | 第16页 |
| ·稻瘟病菌的侵染循环过程 | 第16-17页 |
| ·稻瘟病菌的防治 | 第17页 |
| ·稻瘟病菌是丝状病原真菌分子生物学研究的模式 | 第17-18页 |
| ·三唑类杀菌剂的研究进展 | 第18-23页 |
| ·三唑类杀菌剂的种类与杀菌谱 | 第19-20页 |
| ·三唑类杀菌剂对作物生长的调节作用 | 第20-21页 |
| ·三唑类杀菌剂的抗药性 | 第21页 |
| ·三唑类杀菌剂的安全性及残留 | 第21-22页 |
| ·丙环唑及其靶标位点CYP51 基因 | 第22-23页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第23-26页 |
| ·选择性标记 | 第24-25页 |
| ·转化载体 | 第25-26页 |
| ·根癌农杆菌介导的转化(ATMT) | 第26-30页 |
| ·ATMT 在丝状真菌上应用的研究现状 | 第26页 |
| ·根癌农杆菌介导真菌遗传转化的机理 | 第26-28页 |
| ·根癌农杆菌介导丝状真菌转化的一般方法 | 第28-29页 |
| ·根癌农杆菌介导的丝状真菌转化的特点 | 第29-30页 |
| ·绿色荧光蛋白研究进展 | 第30-33页 |
| ·GFP 的生化性质 | 第30-31页 |
| ·绿色荧光蛋白标记的优点 | 第31-32页 |
| ·GFP 基因标记的方式 | 第32-33页 |
| ·稻瘟菌致病相关基因的研究进展 | 第33-41页 |
| ·分生孢子形成相关基因 | 第33-34页 |
| ·附着孢发育相关基因 | 第34-37页 |
| ·界面硬度和疏水性影响附着胞的分化 | 第34页 |
| ·分生孢子分泌疏水蛋白识别胞外信号 | 第34-35页 |
| ·细胞质膜跨膜蛋白识别和传递胞外信号至胞内 | 第35-36页 |
| ·甘油合成相关基因 | 第36页 |
| ·黑色素合成相关基因 | 第36-37页 |
| ·与致病相关的胞内信号传导途径 | 第37-41页 |
| ·cAMP 途径 | 第37-38页 |
| ·G 蛋白途径 | 第38页 |
| ·MAP kinase 途径 | 第38-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-60页 |
| ·实验室所用各类培养基、抗生素及工具酶 | 第41-43页 |
| ·培养基 | 第41-43页 |
| ·各类抗生素 | 第43页 |
| ·各类工具酶 | 第43页 |
| ·各类生化试剂、溶液及试剂盒 | 第43页 |
| ·常规分子生物学实验方法 | 第43-47页 |
| ·各类PCR 反应 | 第43-45页 |
| ·DNA 酶切 | 第45-46页 |
| ·酶切片段的去磷酸化(SAP) | 第46页 |
| ·质粒DNA 提取 | 第46页 |
| ·DNA 片段的凝胶回收 | 第46页 |
| ·连接反应 | 第46页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及细菌转化克隆 | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌对三唑类杀菌剂丙环唑的敏感性检测方法与材料 | 第47-52页 |
| ·试验材料 | 第47页 |
| ·供试药剂 | 第47页 |
| ·稻瘟菌株来源 | 第47页 |
| ·供试菌株的活化 | 第47-48页 |
| ·药剂的配制 | 第48页 |
| ·稻瘟菌对丙环唑的敏感性测定 | 第48页 |
| ·丙环唑与其它杀菌剂的交互抗性 | 第48页 |
| ·菌落形态和致病性分析 | 第48-49页 |
| ·不同稻瘟病菌菌株DNA 指纹图谱分析 | 第49-50页 |
| ·菌丝准备 | 第49页 |
| ·稻瘟菌DNA 的提取 | 第49页 |
| ·微卫星DNA 指纹图谱PCR | 第49-50页 |
| ·CYP51 基因DNA 序列分析 | 第50页 |
| ·PCR 引物设计 | 第50页 |
| ·CYP51 基因的克隆、测序 | 第50页 |
| ·CYP51 基因序列的获得与序列分析 | 第50页 |
| ·CYP51 基因表达量分析 | 第50-52页 |
| ·RNA 的提取及纯化 | 第50-51页 |
| ·反转录cDNA 荧光实时定量PCR (RT-PCR) 分析 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟病菌转化、致病突变体筛选材料与方法 | 第52-60页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·试验菌株 | 第52页 |
| ·质粒载体 | 第52-53页 |
| ·水稻、大麦致病性测定品种 | 第53页 |
| ·菌种保存及培养条件 | 第53页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌T-DNA 转化 | 第53-54页 |
| ·农杆菌AGL-1 电感受态制备及pATMT1 质粒电转化 | 第53-54页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌转化 | 第54页 |
| ·转化子的初步筛选及遗传稳定性检测 | 第54-55页 |
| ·大麦和水稻离体接种 | 第54-55页 |
| ·突变体遗传稳定性检测 | 第55页 |
| ·表型分析 | 第55-57页 |
| ·致病性分析 | 第55-56页 |
| ·菌落生长速度及菌落特性、产孢培养和产孢量 | 第56页 |
| ·附着胞形成实验 | 第56页 |
| ·稻瘟菌有性生殖实验 | 第56页 |
| ·稻瘟菌单孢分离实验 | 第56-57页 |
| ·单孢分离后潮霉素抗性与致病性实验 | 第57页 |
| ·突变体突变基因鉴定与序列分析 | 第57-58页 |
| ·突变体T-DNA 插入基因的分离 | 第57-58页 |
| ·基因的克隆、测序 | 第58页 |
| ·基因的序列分析和同源性分析 | 第58页 |
| ·突变体性状互补转化 | 第58-60页 |
| ·互补载体的构建 | 第58页 |
| ·稻瘟菌原生质体的制备与互补转化 | 第58-60页 |
| ·数据分析方法 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-87页 |
| ·稻瘟病菌对丙环唑的敏感性检测 | 第60-74页 |
| ·水稻稻瘟菌对丙环唑的敏感性 | 第60-62页 |
| ·水稻稻瘟菌对丙环唑的EC_(50) 结果 | 第60-61页 |
| ·稻瘟病菌对丙环唑敏感性频率分布 | 第61-62页 |
| ·稻瘟菌对丙环唑与稻瘟菌对多菌灵、三唑酮的交互抗性 | 第62-65页 |
| ·稻瘟菌对多菌灵、三唑酮EC_(50) 结果 | 第62-63页 |
| ·稻瘟病菌对多菌灵、三唑酮敏感性频率分布 | 第63-64页 |
| ·稻瘟菌对丙环唑与对多菌灵、三唑酮的交互抗性 | 第64-65页 |
| ·菌落形态 | 第65页 |
| ·致病性分析 | 第65-66页 |
| ·菌株遗传背景分析结果 | 第66-67页 |
| ·菌株基因组DNA 的提取 | 第66页 |
| ·M13 PCR 指纹结果 | 第66-67页 |
| ·CYP51 基因序列的获得及分析 | 第67-71页 |
| ·菌株CYP51 基因的扩增 | 第67页 |
| ·CYP51 基因的克隆、测序 | 第67-71页 |
| ·氨基酸序列分析及同源性分析 | 第71页 |
| ·CYP51 基因表达量分析 | 第71-73页 |
| ·RNA 提取、反转录CDNA 的合成 | 第71-72页 |
| ·RT-PCR 结果 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病突变体筛选 | 第74-87页 |
| ·致病缺陷突变体的获得 | 第74-76页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌T-DNA 的转化 | 第74-75页 |
| ·转化子致病性筛选和突变体的获得 | 第75-76页 |
| ·突变体Fy-1230 遗传稳定性检测 | 第76-77页 |
| ·菌落形态和生长速度分析 | 第77-78页 |
| ·分生孢子形态和产孢量 | 第78-81页 |
| ·有性生殖实验 | 第81页 |
| ·突变体Fy-1230 的T-DNA 侧翼DNA 序列的扩增及克隆 | 第81-82页 |
| ·突变体Fy-1230 T-DNA 标记基因的鉴定与分析 | 第82-83页 |
| ·突变体Fy-1230 T-DNA 插入基因的获得序列分析与鉴定 | 第82-83页 |
| ·突变体Fy-1230 突变基因MGG_09926 分析 | 第83页 |
| ·突变体Fy-1230 单孢分离、潮霉素抗性与致病性实验 | 第83-84页 |
| ·Fy-1230 突变体子囊孢子的单孢分离 | 第83页 |
| ·单孢分离后潮霉素抗性实验 | 第83-84页 |
| ·单孢菌落的致病性实验 | 第84页 |
| ·突变体Fy-1230 互补载体的构建 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-86页 |
| ·展望 | 第86-87页 |
| 4 结论 | 第87-89页 |
| ·稻瘟菌对三唑类杀菌剂丙环唑的敏感性及超敏感现象的分子机理 | 第87-88页 |
| ·稻瘟菌对丙环唑、三唑酮及多菌灵的敏感性 | 第87页 |
| ·超敏感现象及其分子机理 | 第87-88页 |
| ·超敏感菌株、普通菌株生长速率及致病性 | 第88页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟病菌转化及致病缺陷突变体 | 第88-89页 |
| ·致病缺陷突变体Fy-1230 | 第88页 |
| ·突变体Fy-1230T-DNA 插入基因 | 第88页 |
| ·MGG_09926 基因功能 | 第88页 |
| ·突变体Fy-1230 互补载体的构建 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 个人简介 | 第99-100页 |
| 导师简介 | 第100页 |
