| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 插图和附表清单 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| ·肿瘤疾病的现状 | 第12页 |
| ·肿瘤诱导因素及相关特征 | 第12-13页 |
| ·端粒与肿瘤 | 第13-14页 |
| ·端粒---一种染色体完整性维护工具 | 第13-14页 |
| ·端粒与肿瘤 | 第14页 |
| ·端粒的维持机制 | 第14-17页 |
| ·端粒酶维持机制及特征 | 第15-16页 |
| ·端粒延长的替代机制(ALT)及其特征 | 第16-17页 |
| ·ALT相关蛋白 | 第17-18页 |
| ·ALT途径的端粒维持机制 | 第18-20页 |
| ·端粒DNA内部复制机制 | 第19页 |
| ·以t-loop为模板的重组机制 | 第19页 |
| ·以环形ECTR为模板重组机制 | 第19-20页 |
| ·以线形ECTR为模板重组机制 | 第20页 |
| ·端粒酶检测方法 | 第20-24页 |
| ·端粒重复序列延伸法(telomere extension assay,TEA) | 第21页 |
| ·实时定量PCR检测hTERT技术 | 第21-22页 |
| ·端粒重复序列扩增法(telomere repeat amplification protocol,TRAP) | 第22-23页 |
| ·半定量法---TRAP法加内对照 | 第22页 |
| ·银染法端粒重复序列扩增法(SS-TRAP) | 第22-23页 |
| ·荧光素标记端粒酶重复序列扩增法 | 第23页 |
| ·杂交保护法(hybridization protection assay,HPA) | 第23-24页 |
| ·p53基因及其在肿瘤发生中的作用 | 第24-25页 |
| ·p53基因的介绍 | 第24页 |
| ·突变p53基因在肿瘤发生中的作用 | 第24-25页 |
| ·肿瘤诱导药物二甲基苯蒽(DMBA) | 第25页 |
| ·二甲基苯蒽 | 第25页 |
| ·二甲基苯蒽在肿瘤诱导方面的效用 | 第25页 |
| ·小鼠端粒酶阴性肿瘤的研究意义 | 第25-27页 |
| 第二章 端粒酶阴性小鼠肿瘤的诱导及细胞培养 | 第27-46页 |
| ·材料与方法 | 第27-35页 |
| ·端粒酶阴性小鼠的繁殖 | 第27页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第27-33页 |
| ·实验试剂 | 第27-28页 |
| ·各种试剂的配制方法 | 第28-32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·技术路线 | 第33页 |
| ·端粒酶阴性小鼠基因型的验证方法 | 第33-35页 |
| ·小鼠分笼及基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·小鼠基因型的鉴定 | 第34-35页 |
| ·端粒酶阴性小鼠肿瘤诱导方法 | 第35-37页 |
| ·细胞培养方法 | 第37-42页 |
| ·细胞的复苏,传代,冻存和运输 | 第37-39页 |
| ·肿瘤组织的培养 | 第39-40页 |
| ·组织细胞传代与移植 | 第40-41页 |
| ·肿瘤细胞单克隆培养方法 | 第41页 |
| ·细胞计数 | 第41-42页 |
| ·H&E染色技术 | 第42-43页 |
| ·细胞核染色原理 | 第42页 |
| ·细胞质染色原理 | 第42-43页 |
| ·成纤维细胞的去除 | 第43-46页 |
| ·酶消化法 | 第43-44页 |
| ·机械刮除法 | 第44页 |
| ·单克隆筛选法 | 第44页 |
| ·反复贴壁法 | 第44-46页 |
| 第三章 实验结果 | 第46-65页 |
| ·小鼠基因型的检测 | 第46页 |
| ·小鼠诱导成瘤 | 第46-55页 |
| ·野生型小鼠成瘤情况 | 第47-49页 |
| ·端粒酶阴性(mTR~(-/-)p53~(-/-))小鼠诱导成瘤情况 | 第49-55页 |
| ·端粒酶阴性mTR~(-/-)p53~(-/-)小鼠自发瘤情况 | 第55页 |
| ·肿瘤组织培养 | 第55-61页 |
| ·组织培养的特性 | 第55-58页 |
| ·单克隆细胞培养 | 第58-61页 |
| ·细胞移植成瘤性分析 | 第61-63页 |
| ·细胞移植成瘤mTR基因型分析 | 第63-65页 |
| 第四章 讨论 | 第65-69页 |
| ·小鼠杂交亲本的优化及种群的建立 | 第65页 |
| ·DMBA诱导端粒酶阴性小鼠肿瘤的效果分析 | 第65-67页 |
| ·肿瘤细胞系成瘤能力及单克隆的分析 | 第67页 |
| ·肿瘤组织培养方法 | 第67-68页 |
| ·去除成纤维细胞方法的分析 | 第68页 |
| ·端粒酶阴性肿瘤的治疗策略 | 第68-69页 |
| 第五章 总结和展望 | 第69-70页 |
| ·总结 | 第69页 |
| ·展望 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第77页 |
