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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白G基因片段的克隆表达及其表达产物单克隆抗体的制备

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-13页
符号说明第13-15页
综述第15-26页
前言第26-31页
第一部分 gG_Ⅰ基因片段的克隆及重组质粒的鉴定第31-63页
 材料与方法第31-47页
  1 材料第31-36页
   ·生物材料及来源第31页
   ·生化试剂及部分配制方法第31-35页
   ·仪器设备及生产厂家第35-36页
   ·试剂盒第36页
  2 方法第36-47页
   ·HSV-Ⅰ病毒的收集第36-37页
   ·HSV-Ⅰ病毒DNA 模板的提取第37-39页
   ·引物的设计及目的氨基酸序列的抗原性预测第39页
   ·PCR 扩增反应第39-40页
   ·PCR 产物的琼脂糖电泳第40页
   ·PCR 产物的纯化第40-41页
   ·pGEX-4T-1 载体质粒DNA 的提取第41-42页
   ·PCR 纯化产物与载体质粒DNA 的双酶切及纯化回收第42-43页
   ·重组质粒的构建第43-44页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的转化第44-45页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的PCR 筛选第45-46页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的鉴定第46页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的保种第46-47页
 结果第47-58页
  1 HSV-Ⅰ病毒的培养第47页
  2 病毒的灭活第47-48页
  3 引物的设计及目的氨基酸序列的抗原性预测第48-49页
  4 PCR 产物的琼脂糖电泳第49-50页
  5 PCR 产物的纯化第50页
  6 pGEX-4T-1 质粒载体DNA 的提取第50-51页
  7 PCR 纯化产物与质粒载体 DNA 的双酶切及纯化回收第51-52页
  8 重组质粒的构建第52-53页
  9 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的PCR 筛选第53-54页
  10 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的双酶切鉴定第54页
  11 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的 DNA 测序鉴定第54-58页
 讨论第58-60页
 参考文献第60-63页
第二部分 GST/gG_Ⅰ融合蛋白的表达纯化及特性鉴定第63-79页
 材料与方法第63-72页
  1 材料第63-67页
   ·生物材料及来源第63页
   ·生化试剂及部分配制方法第63-67页
   ·仪器设备及生产厂家第67页
   ·试剂盒第67页
  2 方法第67-72页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒转化入表达宿主菌第67-68页
   ·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的诱导表达第68页
   ·表达产物的 SDS-PAGE 电泳检测第68-69页
   ·表达产物的纯化第69-71页
   ·GST/gG_Ⅰ融合蛋白的特性鉴定第71-72页
 结果第72-76页
  1 表达产物的SDS-PAGE 电泳检测第72页
  2 表达产物的纯化第72-75页
  3 GST/gG_Ⅰ融合蛋白的特性鉴定第75-76页
 讨论第76-78页
 参考文献第78-79页
第三部分 gG_Ⅰ重组蛋白单克隆抗体的制备第79-95页
 材料与方法第79-88页
  1 材料第79-81页
   ·生物材料及来源第79页
   ·生化试剂及部分配制方法第79-81页
   ·仪器设备及生产厂家第81页
  2 方法第81-88页
   ·动物免疫及筛选机制的建立第81-82页
   ·饲养细胞的制备第82-83页
   ·细胞融合第83-85页
   ·杂交瘤细胞的筛选第85页
   ·杂交瘤细胞的克隆化第85-86页
   ·杂交瘤细胞的冻存第86-87页
   ·杂交瘤细胞的染色体分析第87-88页
 结果第88-91页
  1 动物免疫及筛选机制的建立第88-89页
  2 细胞融合第89-90页
  3 杂交瘤细胞的筛选第90-91页
  4 杂交瘤细胞的染色体分析第91页
 讨论第91-94页
 参考文献第94-95页
致谢第95-96页
攻读学位期间发表的学术论文目录第96页

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