中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-13页 |
符号说明 | 第13-15页 |
综述 | 第15-26页 |
前言 | 第26-31页 |
第一部分 gG_Ⅰ基因片段的克隆及重组质粒的鉴定 | 第31-63页 |
材料与方法 | 第31-47页 |
1 材料 | 第31-36页 |
·生物材料及来源 | 第31页 |
·生化试剂及部分配制方法 | 第31-35页 |
·仪器设备及生产厂家 | 第35-36页 |
·试剂盒 | 第36页 |
2 方法 | 第36-47页 |
·HSV-Ⅰ病毒的收集 | 第36-37页 |
·HSV-Ⅰ病毒DNA 模板的提取 | 第37-39页 |
·引物的设计及目的氨基酸序列的抗原性预测 | 第39页 |
·PCR 扩增反应 | 第39-40页 |
·PCR 产物的琼脂糖电泳 | 第40页 |
·PCR 产物的纯化 | 第40-41页 |
·pGEX-4T-1 载体质粒DNA 的提取 | 第41-42页 |
·PCR 纯化产物与载体质粒DNA 的双酶切及纯化回收 | 第42-43页 |
·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的转化 | 第44-45页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的PCR 筛选 | 第45-46页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的鉴定 | 第46页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的保种 | 第46-47页 |
结果 | 第47-58页 |
1 HSV-Ⅰ病毒的培养 | 第47页 |
2 病毒的灭活 | 第47-48页 |
3 引物的设计及目的氨基酸序列的抗原性预测 | 第48-49页 |
4 PCR 产物的琼脂糖电泳 | 第49-50页 |
5 PCR 产物的纯化 | 第50页 |
6 pGEX-4T-1 质粒载体DNA 的提取 | 第50-51页 |
7 PCR 纯化产物与质粒载体 DNA 的双酶切及纯化回收 | 第51-52页 |
8 重组质粒的构建 | 第52-53页 |
9 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的PCR 筛选 | 第53-54页 |
10 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的双酶切鉴定 | 第54页 |
11 pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的 DNA 测序鉴定 | 第54-58页 |
讨论 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-63页 |
第二部分 GST/gG_Ⅰ融合蛋白的表达纯化及特性鉴定 | 第63-79页 |
材料与方法 | 第63-72页 |
1 材料 | 第63-67页 |
·生物材料及来源 | 第63页 |
·生化试剂及部分配制方法 | 第63-67页 |
·仪器设备及生产厂家 | 第67页 |
·试剂盒 | 第67页 |
2 方法 | 第67-72页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒转化入表达宿主菌 | 第67-68页 |
·pGEX-4T-1/gG_Ⅰ重组质粒的诱导表达 | 第68页 |
·表达产物的 SDS-PAGE 电泳检测 | 第68-69页 |
·表达产物的纯化 | 第69-71页 |
·GST/gG_Ⅰ融合蛋白的特性鉴定 | 第71-72页 |
结果 | 第72-76页 |
1 表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第72页 |
2 表达产物的纯化 | 第72-75页 |
3 GST/gG_Ⅰ融合蛋白的特性鉴定 | 第75-76页 |
讨论 | 第76-78页 |
参考文献 | 第78-79页 |
第三部分 gG_Ⅰ重组蛋白单克隆抗体的制备 | 第79-95页 |
材料与方法 | 第79-88页 |
1 材料 | 第79-81页 |
·生物材料及来源 | 第79页 |
·生化试剂及部分配制方法 | 第79-81页 |
·仪器设备及生产厂家 | 第81页 |
2 方法 | 第81-88页 |
·动物免疫及筛选机制的建立 | 第81-82页 |
·饲养细胞的制备 | 第82-83页 |
·细胞融合 | 第83-85页 |
·杂交瘤细胞的筛选 | 第85页 |
·杂交瘤细胞的克隆化 | 第85-86页 |
·杂交瘤细胞的冻存 | 第86-87页 |
·杂交瘤细胞的染色体分析 | 第87-88页 |
结果 | 第88-91页 |
1 动物免疫及筛选机制的建立 | 第88-89页 |
2 细胞融合 | 第89-90页 |
3 杂交瘤细胞的筛选 | 第90-91页 |
4 杂交瘤细胞的染色体分析 | 第91页 |
讨论 | 第91-94页 |
参考文献 | 第94-95页 |
致谢 | 第95-96页 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第96页 |