| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-17页 |
| 目录 | 第17-22页 |
| 前言 | 第22-29页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第1章 CML28与APCcdh1相互作用的预测与初步验证 | 第29-50页 |
| 1. 材料、仪器与试剂 | 第29-30页 |
| ·研究对象 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| 2. 实验方法 | 第30-37页 |
| ·生物信息学方法预测 | 第30-31页 |
| ·蛋白-蛋白相互作用的验证试验 | 第31-37页 |
| ·内源性免疫共沉淀实验(CO-IP) | 第31页 |
| ·内源性共定位实验(免疫荧光) | 第31-32页 |
| ·外源性共定位实验 | 第32-37页 |
| ·pEGFP-C1-APCcdh1和pdsRed2-C1-CML28真核表达载体的构建 | 第32-35页 |
| ·质粒的中量抽提 | 第35-36页 |
| ·细胞培养 | 第36页 |
| ·细胞的瞬时转染实验(Transient transfection) | 第36-37页 |
| 3. 结果 | 第37-43页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用的预测 | 第37-39页 |
| ·APCcdh1与CML28相互作用的验证 | 第39-43页 |
| ·内源性免疫共沉淀验证APCcdh1与CML28的相互作用 | 第39页 |
| ·内源性共定位分析 | 第39-41页 |
| ·基因片段扩增及重组子PCR扩增检测 | 第41-42页 |
| ·外源性共定位分析 | 第42-43页 |
| 4. 讨论 | 第43-47页 |
| 5. 小结 | 第47页 |
| 6. 参考文献 | 第47-50页 |
| 第2章 慢性髓细胞白血病急变期患者APCcdh1的表达 | 第50-71页 |
| 1. 材料、仪器与试剂 | 第51-57页 |
| ·研究对象 | 第51-52页 |
| ·主要仪器和器材 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要试剂的配制 | 第54-57页 |
| 2. 实验方法 | 第57-63页 |
| ·制备骨髓单个核细胞 | 第57页 |
| ·Western blot检测蛋白表达 | 第57-62页 |
| ·免疫荧光方法检测蛋白表达和分布 | 第62页 |
| ·统计学分析 | 第62-63页 |
| 3. 结果 | 第63-66页 |
| ·APCcdh1在CML-BC患者中的表达 | 第63-65页 |
| ·APCcdh1和Skp2蛋白在CML细胞中的分布 | 第65-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-68页 |
| 5. 小结 | 第68页 |
| 6. 参考文献 | 第68-71页 |
| 第3章 伊马替尼和硼替佐米对APCcdh1-Skp2-p27通路及APCcdh1蛋白定位的影响 | 第71-83页 |
| 1. 材料、仪器与试剂 | 第72-73页 |
| ·研究对象 | 第72页 |
| ·主要仪器、器材 | 第72页 |
| ·主要试剂 | 第72-73页 |
| ·主要试剂的配制 | 第73页 |
| 2. 实验方法 | 第73-75页 |
| ·细胞培养 | 第73页 |
| ·Western-blot法检测APCcdh1-skp2-p27通路蛋白表达 | 第73-74页 |
| ·细胞凋亡及细胞周期检测 | 第74页 |
| ·免疫荧光方法检测APCcdh1细胞内分布 | 第74页 |
| ·统计学分析 | 第74-75页 |
| 3. 结果 | 第75-79页 |
| ·伊马替尼及硼替佐米对APCcdh1-Skp2-p27通路的调控 | 第75-76页 |
| ·伊马替尼及硼替佐米处理后细胞周期的变化 | 第76-77页 |
| ·伊马替尼及硼替佐米处理后细胞凋亡的变化 | 第77-78页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测用药处理前后APCcdh1定位的变化 | 第78-79页 |
| 4. 讨论 | 第79-81页 |
| 5. 小结 | 第81页 |
| 6. 参考文献 | 第81-83页 |
| 第4章 siAPCcdh1对CML-BC细胞的生物学特性的影响 | 第83-99页 |
| 1. 材料、仪器与试剂 | 第83-86页 |
| ·细胞株与原代细胞 | 第83页 |
| ·病例标本 | 第83-84页 |
| ·主要仪器、器材 | 第84页 |
| ·主要试剂 | 第84-85页 |
| ·主要试剂的配制 | 第85-86页 |
| 2. 实验方法 | 第86-90页 |
| ·细胞复苏、培养传代及冻存 | 第86-87页 |
| ·细胞复苏 | 第86页 |
| ·细胞培养 | 第86-87页 |
| ·细胞换液传代 | 第87页 |
| ·细胞冻存 | 第87页 |
| ·细胞计数方法 | 第87页 |
| ·台盼蓝(trypan blue)拒染活细胞记数法 | 第87-88页 |
| ·RNA干扰片段的设计及合成 | 第88页 |
| ·化学合成siRNA瞬时转染K562细胞 | 第88-89页 |
| ·CCK-8检测细胞增殖抑制率 | 第89页 |
| ·转染效率检测 | 第89页 |
| ·流式细胞术检测APCcdhl表达沉默对K562细胞周期的影响 | 第89-90页 |
| ·统计学分析 | 第90页 |
| 3. 结果 | 第90-95页 |
| ·干扰效率 | 第90-92页 |
| ·干扰APCcdh1对CML-BC细胞增殖动力学的影响 | 第92-93页 |
| ·干扰APCcdh1对细胞形态变化的影响 | 第93-94页 |
| ·干扰APCcdh1对APCcdh1-Skp2-p27通路及Cdc20的影响 | 第94-95页 |
| 4. 讨论 | 第95-97页 |
| 5. 小结 | 第97页 |
| 6. 参考文献 | 第97-99页 |
| 全文总结 | 第99-100页 |
| 综述 | 第100-117页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 附录 | 第117-119页 |
| 成果 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-122页 |
| 统计学合格证明 | 第122页 |
