| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一章 嵌合AFP增强子-TK/CD双自杀基因真核表达载体构建 | 第13-29页 |
| 1 材料与方法 | 第13-16页 |
| ·材料 | 第13-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-20页 |
| ·主要分子生物实验 | 第16-18页 |
| ·嵌合增强子AFP的克隆 | 第18页 |
| ·TK/CD基因的克隆和载体AFPE-pTK-IRES-CD的构建 | 第18-19页 |
| ·AFP增强子在肝癌细胞阳性表达的证实及其作用 | 第19-20页 |
| 3 实验结果 | 第20-24页 |
| ·基因的扩增 | 第20页 |
| ·AFP增强子克隆的酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·重组质粒AFPE-pTK-IRES-CD PCR鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒AFPE-pTK-IRES-CD酶切鉴定 | 第21-22页 |
| ·重组质粒AFPE-pTK-IRES-CD基因测序 | 第22页 |
| ·间接免疫荧光检测HpG2和HeLa细胞内AFP表达 | 第22-23页 |
| ·Western blot检测HepG2和HeLa细胞AFP表达 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-28页 |
| 5 结论 | 第28-29页 |
| 第二章 磁性阳离子脂质体基因载体的制备及与质粒DNA的连接 | 第29-46页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| ·试剂与药品 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-34页 |
| ·磁性阳离子脂质体的制备 | 第30-31页 |
| ·磁性阳离子脂质体的理化性质测定 | 第31-32页 |
| ·磁性阳离子脂质体的生物学性能测试 | 第32-34页 |
| ·统计学处理 | 第34页 |
| 3 实验结果 | 第34-42页 |
| ·磁性阳离子脂质体的形态、粒径和Zeta电位 | 第34-36页 |
| ·磁性阳离子脂质体的生物学性能测试结果 | 第36-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 第三章 磁性阳离子脂质体介导的AFPE-pTK-IRES-CD系统对肝癌基因治疗的体外实验研究 | 第46-71页 |
| 1 材料与仪器 | 第46-48页 |
| ·细胞系和培养条件 | 第46-47页 |
| ·质粒 | 第47页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| ·引物 | 第48页 |
| 2 试验方法 | 第48-57页 |
| ·体外转染实验 | 第48页 |
| ·G418正筛选转染细胞 | 第48页 |
| ·G418筛选出的细胞克隆的扩大培养 | 第48-49页 |
| ·GCV和5-FC负筛选转染细胞 | 第49页 |
| ·RT-PCR鉴定目的基因表达 | 第49-50页 |
| ·Westem Blot鉴定目的基因表达 | 第50-52页 |
| ·免疫荧光试验 | 第52-53页 |
| ·不同前体药物及浓度组合对HepG2细胞和CD/TK阳性细胞的杀伤作用 | 第53-54页 |
| ·集落形成实验法测定CD/TK融合自杀基因前药系统对HepG2细胞克隆形成率的影响 | 第54页 |
| ·CD/TK自杀基因前药系统旁观者效应实验 | 第54-55页 |
| ·以磁性阳离子为载体介导自杀基因CD/TK对肝癌细胞的杀伤效应 | 第55页 |
| ·细胞上清中5-FU的测定及在细胞中的产生规律的初步分析 | 第55-56页 |
| ·免疫组化法测定HepG2细胞中CD/TK基因在蛋白水平的表达差异 | 第56-57页 |
| ·丫啶橙和溴化乙啶双染色结合荧光显微镜技术观察细胞凋亡形态 | 第57页 |
| ·统计学处理 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-67页 |
| ·CDglyTK mRNA在Hela和HepG2中的表达 | 第57-58页 |
| ·阳性细胞的筛选 | 第58页 |
| ·免疫荧光结果: | 第58-59页 |
| ·Western-blotting结果 | 第59-60页 |
| ·前体药物5-FC对HepG2细胞毒性检测 | 第60-61页 |
| ·CD/TK基因前药系统对HepG2细胞克隆形成率的影响 | 第61-62页 |
| ·自杀基因系统的旁杀效应 | 第62-63页 |
| ·磁性阳离子脂质体介导自杀基因pAFPE-pTK-IRES-CD体外治疗肝癌 | 第63-64页 |
| ·细胞上清中5-FU的测定及在细胞中的产生规律的初步分析 | 第64-65页 |
| ·细胞免疫组化染色检测 | 第65-66页 |
| ·丫啶橙和溴化乙啶双染色结合荧光显微镜技术观察细胞凋亡形态 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-71页 |
| 总结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 综述 | 第82-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第106页 |
