| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一部分 用蛋白质印迹聚合物分离富集天然微量蛋白质的研究 | 第12-74页 |
| 第一章 前言 | 第12-40页 |
| 第一节 分子印迹技术的发展概况 | 第12-22页 |
| ·分子印迹技术的发展历史及国内外研究状况 | 第12-13页 |
| ·分子印迹技术的基本概念和原理 | 第13-14页 |
| ·印迹聚合物的制备原理 | 第14-16页 |
| ·MIP制备步骤 | 第16-18页 |
| ·分子印迹聚合中使用的载体 | 第18-22页 |
| 第二节 蛋白质分子印迹技术进展 | 第22-34页 |
| ·制备蛋白质分子印迹聚合物需考虑因素 | 第22-24页 |
| ·蛋白质分子印迹的识别机理 | 第24-25页 |
| ·蛋白质分子印迹聚合物的制备方法 | 第25-30页 |
| ·蛋白质分子印迹技术的研究现状 | 第30-32页 |
| ·蛋白质分子印迹技术的应用前景及发展趋势 | 第32-34页 |
| 第三节 我组对蛋白质印迹技术的发展 | 第34-36页 |
| ·蛋白质印迹体系中引入辅助识别聚合物链 | 第34-35页 |
| ·带有羧基识别基团的蛋白质印迹聚合物 | 第35-36页 |
| ·带有氨基识别基团的蛋白质印迹聚合物 | 第36页 |
| 第四节 亲环素18蛋白质 | 第36-39页 |
| ·亲免蛋白家族 | 第36-37页 |
| ·亲免蛋白的肽脯氨酰顺反异构酶活性 | 第37-38页 |
| ·亲环素18 | 第38-39页 |
| 第五节 本课题的指导思想 | 第39-40页 |
| 第二章 实验部分 | 第40-62页 |
| 第一节 试剂与实验仪器 | 第40-43页 |
| ·化学试剂 | 第40页 |
| ·分子生物学试剂 | 第40-42页 |
| ·实验仪器 | 第42-43页 |
| 第二节 缓冲液及贮存液的配制 | 第43-49页 |
| ·细菌培养 | 第43页 |
| ·融合蛋白的表达及提取 | 第43-44页 |
| ·凝血因子Xa对融合蛋白的裂解 | 第44页 |
| ·猪肝脏中细胞提取物及内质网体提取物的提取 | 第44页 |
| ·蛋白质印迹聚合物的制备及吸附 | 第44-45页 |
| ·Bradford法测量蛋白质含量 | 第45页 |
| ·三氯乙酸沉淀蛋白质 | 第45页 |
| ·变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第45-47页 |
| ·银染法 | 第47页 |
| ·免疫印迹(Western Blot) | 第47-48页 |
| ·测定PPIase活性 | 第48-49页 |
| 第三节 实验方法 | 第49-62页 |
| ·辅助识别聚合物链的制备 | 第49-51页 |
| ·聚乙烯醇大孔微球的功能基化 | 第51页 |
| ·基因克隆 | 第51-53页 |
| ·猪肝脏中细胞提取物及内质网体提取物的提取 | 第53-55页 |
| ·蛋白质印迹聚合物的制备 | 第55-56页 |
| ·蛋白质印迹聚合物的应用 | 第56-57页 |
| ·蛋白质的检测 | 第57-60页 |
| ·克隆和天然猪亲环素18的肽脯氨酰顺反异构酶活性的测定 | 第60-62页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第62-73页 |
| 第一节 辅助识别聚合物链库的构建 | 第62-66页 |
| ·辅助识别聚合物链的设计 | 第62-63页 |
| ·第二单体的选择 | 第63页 |
| ·辅助识别聚合物链的表征 | 第63-66页 |
| 第二节 蛋白质印迹聚合物对天然猪亲环素18的富集效果 | 第66-70页 |
| ·对照组的建立 | 第66页 |
| ·银染及免疫印迹结果 | 第66-70页 |
| 第三节 肽脯氨酰顺反异构酶活性的测定 | 第70-73页 |
| 第四章 第一部分总结 | 第73-74页 |
| 第二部分 用nested PCR方法阐明编码猪内质网体中FKBP23的cDNA及克隆表达的研究 | 第74-122页 |
| 第五章 前言 | 第74-86页 |
| 第一节 亲免蛋白研究概况 | 第74-79页 |
| ·亲免蛋白家族 | 第74-78页 |
| ·内质网体 | 第78-79页 |
| 第二节 Nested PCR | 第79-85页 |
| ·PCR原理 | 第79-81页 |
| ·Nested PCR原理 | 第81页 |
| ·用于nested PCR双链cDNA构理 | 第81-85页 |
| 第三节 本课题的指导思想 | 第85-86页 |
| 第六章 实验部分 | 第86-103页 |
| 第一节 试剂 | 第86-87页 |
| ·试剂 | 第86-87页 |
| 第二节 缓冲液及贮存液的配制 | 第87-89页 |
| ·分子克隆 | 第87-88页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第88-89页 |
| 第三节 实验方法 | 第89-103页 |
| ·总RNA的提取 | 第89-90页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第90-91页 |
| ·cDNA第二链的合成 | 第91-92页 |
| ·Adaptor的复性 | 第92页 |
| ·cDNA第二链的补平及与Adaptor连接 | 第92-93页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第93-96页 |
| ·PCR扩增产物酶切 | 第96-98页 |
| ·连接 | 第98-99页 |
| ·感受态的制备 | 第99-100页 |
| ·质粒转化 | 第100页 |
| ·质粒鉴定 | 第100-103页 |
| 第七章 实验结果与讨论 | 第103-121页 |
| 第一节 PFKBP23中间序列的扩增 | 第103-109页 |
| ·PCR引物的设计 | 第103-106页 |
| ·PCR条件的选择 | 第106页 |
| ·PCR扩增目的基因序列的结果 | 第106-107页 |
| ·目的基因克隆的制备 | 第107-108页 |
| ·序列同源性分析 | 第108-109页 |
| 第二节 用Nested PCR扩增pFKBP23的3'端和5'端序列 | 第109-112页 |
| ·用于nested PCR双链cDNA的构建 | 第109-110页 |
| ·Nested PCR引物设计 | 第110页 |
| ·PCR结果 | 第110-111页 |
| ·质粒鉴定结果 | 第111-112页 |
| 第三节 PFKBP23的序列分析 | 第112-115页 |
| ·pFKBP23的核苷酸及氨基酸序列分析 | 第112-115页 |
| 第四节 PFKBP23全长序列的扩增 | 第115-116页 |
| ·pFKBP23 PCR引物设计 | 第115页 |
| ·PFKBP23全长PCR结果及质粒鉴定 | 第115-116页 |
| 第五节 PFKBP23蛋白的表达 | 第116-121页 |
| ·融合蛋白的表达及鉴定 | 第116-117页 |
| ·融合蛋白的大量提取 | 第117-119页 |
| ·融合蛋白的裂解 | 第119页 |
| ·pFKBP23与内质网体中pBiP特异性结合并且结合受Ca~(2+)浓度的调控 | 第119-121页 |
| 第八章 第二部分总结 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第133页 |
