| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 第一章 综述 | 第8-21页 |
| ·空间骨丢失现象 | 第8-11页 |
| ·正常重力下的骨代谢 | 第9页 |
| ·成骨细胞的分化过程 | 第9-10页 |
| ·微重力对成骨细胞分化的影响 | 第10-11页 |
| ·骨向分化特异性转录因子CBFA1 | 第11-14页 |
| ·Cbfa1 概况 | 第11-13页 |
| ·Cbfa1 的功能 | 第13-14页 |
| ·微重力对Cbfa1 的影响 | 第14页 |
| ·信号通路对CBFA1 的表达与活性影响 | 第14-18页 |
| ·Cbfa1 的表达及活性调节 | 第14-15页 |
| ·多种信号通路聚焦于Cbfa1 | 第15-16页 |
| ·P13K-Akt 信号通路在成骨细胞分化中的作用 | 第16-17页 |
| ·微重力影响P13K-Akt 信号通路 | 第17-18页 |
| ·微重力下骨代谢的研究方法 | 第18-19页 |
| ·微重力模拟方法及其应用 | 第18-19页 |
| ·实时报告基因——绿色荧光蛋白GFP | 第19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 构建用荧光强度反映CBFA1 活性的成骨细胞模型 | 第21-34页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| ·试剂及其配制 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-28页 |
| ·6OSE2 基因启动子扩增 | 第23-24页 |
| ·p6OSE2-EGFP 表达载体构建 | 第24-26页 |
| ·MG63 细胞培养、传代的方法 | 第26页 |
| ·G418 最小致死浓度确定 | 第26页 |
| ·脂质体法转染MG63 细胞 | 第26-27页 |
| ·OSE-MG63 稳定转染细胞株的筛选 | 第27页 |
| ·OSE-EGFP 稳定细胞株荧光强度分析 | 第27页 |
| ·细胞内碱性磷酸酶ALP 染色方法（改良Gomori 法） | 第27-28页 |
| ·细胞培养液碱性磷酸酶ALP 活性测定方法 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-32页 |
| ·6OSE2 基因启动子扩增 | 第28-29页 |
| ·表达载体的鉴定结果 | 第29页 |
| ·G418 最小致死浓度的确定 | 第29页 |
| ·稳定转染6OSE2-EGFP 基因细胞株的筛选 | 第29-30页 |
| ·OSE-MG63 细胞株对骨向诱导剂的响应 | 第30-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 不同重力条件对CBFA1 活性及信号通路的影响 | 第34-46页 |
| ·材料 | 第34-36页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·MG63 细胞在回转模拟微重力下的培养方法 | 第36页 |
| ·MG63 细胞在超重条件下的培养方法 | 第36-37页 |
| ·静止条件下加入P13K 激活剂及抑制剂培养MG63 的方法 | 第37页 |
| ·模拟微重力环境下加入P13K 激活剂培养OSE-MG63 的方法 | 第37页 |
| ·超重环境下加入P13K 抑制剂培养OSE-MG63 的方法 | 第37-38页 |
| ·细胞裂解及总蛋白提取 | 第38页 |
| ·细胞总蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·Western-Blot 检测信号分子蛋白表达 | 第39-40页 |
| ·OSE-MG63 细胞荧光强度分析方法（如2.3.7） | 第40页 |
| ·细胞内ALP 染色方法（如2.3.8） | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·模拟微重力环境下p38、Erk1/2 和p85 蛋白表达变化 | 第40页 |
| ·不同重力环境对p85 及Cbfa1 蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| ·IGF-I 对p85 蛋白表达及磷酸化的影响 | 第41页 |
| ·模拟微重力环境下P13K 激活剂对Cbfa1 活性及骨向分化的影响 | 第41-42页 |
| ·超重环境下P13K 抑制剂对Cbfa1 活性及骨向分化的影响 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
