农杆菌介导人胰岛素基因BCA转化银耳研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1 银耳研究历史 | 第11-12页 |
| 2 微生物诱变技术发展 | 第12-15页 |
| ·物理诱变方法 | 第12-14页 |
| ·紫外线诱变 | 第12页 |
| ·激光诱变 | 第12-13页 |
| ·离子束注入诱变 | 第13页 |
| ·微波诱变 | 第13-14页 |
| ·电离辐射诱变 | 第14页 |
| ·化学诱变 | 第14-15页 |
| 3 食用菌转化方法研究 | 第15-18页 |
| ·PEG 介导转化 | 第15-16页 |
| ·限制性内切酶介导整合法(REMI) | 第16页 |
| ·基因枪法 | 第16-17页 |
| ·电击法 | 第17页 |
| ·农杆菌介导转化 | 第17-18页 |
| 4 银耳遗传转化体系研究 | 第18页 |
| 5 基因重组人胰岛素研究进展 | 第18-21页 |
| ·在大肠杆菌中表达 | 第19页 |
| ·在酵母菌中表达 | 第19-20页 |
| ·在转基因植物中表达 | 第20页 |
| ·在转基因动物中表达 | 第20-21页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 紫外诱变筛选银耳菌株 | 第22-27页 |
| 1 材料与方法 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·供试菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-23页 |
| ·紫外线诱变 | 第22-23页 |
| ·对潮霉素敏感菌株筛选 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-26页 |
| ·不同照射时间对致死率影响 | 第23-24页 |
| ·初筛 | 第24-25页 |
| ·复筛 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 农杆菌介导法转化银耳芽孢 | 第27-36页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·碱裂解法提质粒溶液 | 第28-29页 |
| ·电泳缓冲液 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·仪器设备 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-32页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第29-30页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第30页 |
| ·农杆菌菌落PCR | 第30-31页 |
| ·农杆菌介导外源基因转化银耳芽孢 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-35页 |
| ·质粒转化农杆菌 | 第32页 |
| ·农杆菌介导人胰岛素基因转化银耳 Tr21-01 | 第32-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 农杆菌介导转化条件优化 | 第36-42页 |
| 1 材料与方法 | 第36-37页 |
| ·材料 | 第36页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-37页 |
| ·共培养时间 | 第36-37页 |
| ·乙酰丁香酮浓度 | 第37页 |
| ·银耳芽孢浓度 | 第37页 |
| ·农杆菌浓度 | 第37页 |
| ·银耳芽孢不同处理 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·共培养时间 | 第37-38页 |
| ·AS 浓度 | 第38-39页 |
| ·银耳芽孢浓度 | 第39-40页 |
| ·农杆菌浓度 | 第40页 |
| ·银耳芽孢不同处理 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 转化子验证 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第42-49页 |
| ·材料 | 第42-44页 |
| ·供试菌株及质粒 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·CTAB 法提DNA 试剂 | 第42-43页 |
| ·Southern blot 缓冲液 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·潮霉素抗性验证 | 第44页 |
| ·CTAB 法提取基因组DNA | 第44-45页 |
| ·基因组DNA PCR 分析 | 第45页 |
| ·RT-PCR | 第45-47页 |
| ·Southern 杂交 | 第47-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-54页 |
| ·拟转化子涂布SM 平板 | 第49-51页 |
| ·转化子PCR 分析 | 第51-52页 |
| ·ITS 检测 | 第51页 |
| ·hph 基因 | 第51-52页 |
| ·人胰岛素基因BCA | 第52页 |
| ·RT-PCR | 第52-53页 |
| ·Southern 杂交 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 缩略词 | 第57-58页 |
| 附录1 质粒图谱 | 第58-59页 |
| 附录2 启动子及基因序列 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
