| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1.前言 | 第12-24页 |
| ·植物金属硫蛋白的研究进展 | 第12-19页 |
| ·植物金属硫蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·植物金属硫蛋白的结构,性质 | 第13页 |
| ·空间结构 | 第13页 |
| ·理化性质 | 第13页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的结构 | 第13-17页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的拷贝数 | 第13-14页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的内含子 | 第14页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的启动子 | 第14-15页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的上游调控序列 | 第15页 |
| ·植物金属硫蛋白基因的表达 | 第15-16页 |
| ·转植物金属硫蛋白基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·植物金属硫蛋白功能 | 第17-19页 |
| ·清除体内自由基、防止机体衰老 | 第17-18页 |
| ·解除重金属的毒性 | 第18页 |
| ·参与体内微量元素储存、运输和代谢 | 第18-19页 |
| ·增强机体对各种不良状态的适应能力 | 第19页 |
| ·抗电离辐射作用 | 第19页 |
| ·乙烯利刺激橡胶树增产的生理生化研究 | 第19页 |
| ·乙烯利刺激橡胶树增产的分子生物学研究 | 第19-22页 |
| ·橡胶生物合成相关基因 | 第20-22页 |
| ·橡胶转移酶基因 | 第20页 |
| ·排胶相关基因 | 第20-21页 |
| ·死皮衰老相关基因 | 第21页 |
| ·蔗糖运输和代谢相关基因 | 第21页 |
| ·其它基因 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2.材料与方法 | 第24-51页 |
| ·材料与试剂 | 第24页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·质粒及菌种 | 第24页 |
| ·生化试剂 | 第24页 |
| ·方法与步骤 | 第24-51页 |
| ·RNA的提取 | 第24-27页 |
| ·准备工作 | 第24-25页 |
| ·橡胶树胶乳Total RNA的提取 | 第25页 |
| ·橡胶树叶片、茎和树皮Total RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·RNA电泳检测 | 第26-27页 |
| ·cDNA的合成 | 第27页 |
| ·5’RACE扩增HbMT2的5’端 | 第27-32页 |
| ·1st Strand cDNA的合成 | 第27-28页 |
| ·Hybrid RNA的分解 | 第28页 |
| ·单链cDNA环化 | 第28-29页 |
| ·PCR反应 | 第29页 |
| ·PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第30-32页 |
| ·连接反应 | 第30页 |
| ·感受态E.coli DH5α的制备 | 第30页 |
| ·感受态鉴定 | 第30-31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·重组子的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·重组子菌种的保存 | 第32页 |
| ·HbMT2全长cDNA的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR产物的回收 | 第33页 |
| ·目的片段的克隆及重组子的筛选 | 第33页 |
| ·基因组DNA对全长的扩增 | 第33-35页 |
| ·叶片基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·PCR扩增 | 第34页 |
| ·PCR产物的回收 | 第34-35页 |
| ·目的片段的克隆及重组子的筛选 | 第35页 |
| ·HbMT2的RT-PCR表达分析 | 第35-36页 |
| ·材料的处理 | 第35页 |
| ·RNA的提取 | 第35页 |
| ·cDNA的合成 | 第35页 |
| ·模板量的确定 | 第35页 |
| ·指数增长期的确定 | 第35-36页 |
| ·18SrRNA基因指数增长期的确定 | 第35-36页 |
| ·HbMT2基因指数增长期的确定 | 第36页 |
| ·RT-PCR分析 | 第36页 |
| ·HbMT2的原核表达 | 第36-40页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·PCR反应 | 第36-37页 |
| ·PCR产物的回收 | 第37页 |
| ·目的片段的克隆及其重组子筛选 | 第37页 |
| ·原核表达载体的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·HbMT2的酶切 | 第37页 |
| ·原核表达载体的酶切 | 第37-38页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第38页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第38页 |
| ·工程菌的表达 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第39页 |
| ·蛋白纯化 | 第39-40页 |
| ·HbMT2金属耐受性和清除活性氧活性分析 | 第40-41页 |
| ·金属耐受性实验 | 第40-41页 |
| ·清除活性氧活性实验 | 第41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·目的片段的扩增 | 第42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42页 |
| ·目的片段的酶切 | 第42页 |
| ·目的片段的再次回收 | 第42页 |
| ·pCAMBIA1304载体的获得 | 第42-43页 |
| ·目的片段与pCAMBIA1304载体的连接 | 第43页 |
| ·感受态的制备,转化,重组质粒的筛选和鉴定,测序. | 第43页 |
| ·遗传转化 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌株及植物材料 | 第43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43-44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·由烟草种子萌发获得无菌苗 | 第44页 |
| ·利用农杆菌介导的外植体遗传转化 | 第44-46页 |
| ·农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的电击转化 | 第44-45页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第45页 |
| ·HbMT2基因表达载体遗传转化植物 | 第45-46页 |
| ·转化植株的分子检测 | 第46-47页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第46页 |
| ·转化植株基因组的PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·抗性检测 | 第47页 |
| ·不同浓度H_2O_2对转基因烟草植株的处理 | 第47页 |
| ·转基因烟草紫外照射实验 | 第47页 |
| ·转HbMT2基因的烟草植株生理指标的测定 | 第47-51页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·转基因烟草组培苗的钴、铜胁迫处理 | 第48页 |
| ·生理指标测定方法 | 第48-51页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第48-49页 |
| ·过氧化氢酶活性的测定 | 第49页 |
| ·过氧化物酶活性的测定 | 第49-51页 |
| 3.结果与分析 | 第51-72页 |
| ·RNA的提取 | 第51页 |
| ·HbMT2基因的克隆 | 第51-54页 |
| ·5’RACE扩增HbMT2的5’端 | 第51-52页 |
| ·HbMT2全长的克隆 | 第52-53页 |
| ·基因组DNA为模板的全长扩增 | 第53-54页 |
| ·HbMT2的生物信息学分析 | 第54-57页 |
| ·蛋白质的特性分析 | 第54-55页 |
| ·HbMT2系统进化树分析 | 第55-57页 |
| ·HbMT2的RT-PCR分析 | 第57-58页 |
| ·HbMT2的组织特异性表达 | 第57页 |
| ·乙烯利刺激对胶乳HbMT2表达的影响 | 第57页 |
| ·伤害对胶乳HbMT2表达的影响 | 第57-58页 |
| ·H_2O_2胁迫对胶乳HbMT2表达的影响 | 第58页 |
| ·HbMT2的原核表达 | 第58-60页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·GST-HbMT2融合蛋白在不同时间的诱导表达分析及纯化 | 第59-60页 |
| ·表达GST-HbMT2融合蛋白的大肠杆菌细胞对金属离子的耐受性 | 第60-62页 |
| ·清除活性氧活性分析 | 第62页 |
| ·HbMT2基因植物表达载体的构建 | 第62-63页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第63页 |
| ·酶切鉴定 | 第63页 |
| ·植物表达载体导入农杆菌 | 第63-64页 |
| ·HbMT2基因遗传转化烟草 | 第64-66页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草植株的抗性检测 | 第67-68页 |
| ·转基因烟草植株对不同浓度H_2O_2的抗性 | 第67页 |
| ·转基因烟草植株对紫外照射的抗性 | 第67-68页 |
| ·转基因植株生理指标的测定 | 第68-72页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第68-69页 |
| ·过氧化物酶活性测定 | 第69-70页 |
| ·过氧化氢酶活性的测定 | 第70-72页 |
| 4.讨论 | 第72-75页 |
| ·关于植物金属硫蛋白基因 | 第72页 |
| ·关于HbMT2基因的表达分析 | 第72-73页 |
| ·关于HbMT2基因的活性分析 | 第73-74页 |
| ·关于转基因植株的抗性分析 | 第74页 |
| ·关于转基因植株生理指标测定 | 第74-75页 |
| 5.结果与结论 | 第75-77页 |
| ·结果 | 第75-76页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 缩略词 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |