| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 脂肪酸的催化转化 | 第11-14页 |
| 1.1.1 脂肪酸 | 第11页 |
| 1.1.2 脂肪酸催化转化的方式 | 第11-13页 |
| 1.1.3 多酶催化所涉及的酶类 | 第13-14页 |
| 1.1.4 脂肪酸生物转化产物的用途 | 第14页 |
| 1.2 油酸水合酶 | 第14-19页 |
| 1.2.1 油酸水合酶的发现 | 第14-15页 |
| 1.2.2 油酸水合酶的结构和催化机理研究 | 第15-16页 |
| 1.2.3 油酸水合酶的分类 | 第16-18页 |
| 1.2.4 油酸水合酶的研究现状 | 第18-19页 |
| 1.3 羟基脂肪酸脱氢酶的来源与性能 | 第19页 |
| 1.4 辅酶循环 | 第19-21页 |
| 1.4.1 辅酶循环的意义 | 第19-20页 |
| 1.4.2 NAD(P)~+的再生 | 第20页 |
| 1.4.3 乳酸脱氢酶系统中的辅酶再生 | 第20-21页 |
| 1.5 酶促级联反应的优缺点 | 第21页 |
| 1.6 本课题的研究目标及研究意义 | 第21-22页 |
| 1.7 本课题的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第2章 油酸水合酶的克隆表达与筛选 | 第23-36页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.2.3 培养基 | 第24页 |
| 2.2.4 菌种和质粒 | 第24-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 油酸水合酶的基因挖掘 | 第26页 |
| 2.3.2 基因组和质粒DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.3 PCR引物设计 | 第27-29页 |
| 2.3.4 目的基因的体外扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.5 构建重组pET-28a质粒 | 第30-31页 |
| 2.3.6 转化与验证 | 第31页 |
| 2.3.7 重组目的蛋白的诱导表达 | 第31页 |
| 2.3.8 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分析 | 第31-32页 |
| 2.3.9 蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| 2.3.10 重组蛋白的催化活力测定 | 第32页 |
| 2.3.11 产物的气相色谱分析方法 | 第32-33页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第33-35页 |
| 2.4.1 油酸水合酶的克隆与表达 | 第33-35页 |
| 2.4.2 油酸水合酶的功能筛选 | 第35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第3章 油酸水合酶的酶学性质研究 | 第36-45页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36页 |
| 3.2.1 试剂 | 第36页 |
| 3.2.2 仪器和设备 | 第36页 |
| 3.3 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.3.1 PaOH粗酶液制备 | 第36页 |
| 3.3.2 纯化缓冲液配制 | 第36-37页 |
| 3.3.3 重组油酸水合酶PaOH的纯化 | 第37页 |
| 3.3.4 pH对PaOH活性的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.5 温度对PaOH活性的影响 | 第38页 |
| 3.3.6 助溶剂对PaOH活性的影响 | 第38页 |
| 3.3.7 PaOH的热稳定性考察 | 第38页 |
| 3.3.8 油酸水合酶PaOH催化动力学参数的测定 | 第38-39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-43页 |
| 3.4.1 油酸水合酶PaOH的分离纯化 | 第39页 |
| 3.4.2 pH对PaOH活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.3 温度对PaOH活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.4 不同助溶剂对PaOH活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.4.5 PaOH的热稳定性考察 | 第42页 |
| 3.4.6 PaOH的动力学参数 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 第4章 油酸水合酶催化合成10-羟基硬脂酸的研究 | 第45-53页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45页 |
| 4.2.1 试剂 | 第45页 |
| 4.2.2 仪器和设备 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 重组菌的发酵 | 第45-46页 |
| 4.3.2 细胞的破碎与冻干酶粉的制备 | 第46页 |
| 4.3.3 冻干酶粉催化油酸水合制备10-羟基硬脂酸的反应优化 | 第46-47页 |
| 4.3.4 放大规模的酶促油酸水合反应 | 第47页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第47-52页 |
| 4.4.1 重组菌的发酵和冻干酶粉的制备 | 第47-48页 |
| 4.4.2 催化生成10-羟基硬脂酸的反应优化 | 第48-50页 |
| 4.4.3 水合反应规模的放大 | 第50-51页 |
| 4.4.4 产物的提取与纯化 | 第51-52页 |
| 4.5 本章小结 | 第52-53页 |
| 第5章 三酶级联催化合成10-羰基硬脂酸的研究 | 第53-61页 |
| 5.1 引言 | 第53页 |
| 5.2 实验材料 | 第53-54页 |
| 5.2.1 试剂 | 第53页 |
| 5.2.2 仪器和设备 | 第53-54页 |
| 5.3 实验方法 | 第54-56页 |
| 5.3.1 MlDH的获得与表达 | 第54页 |
| 5.3.2 MlDH催化活性测定 | 第54页 |
| 5.3.3 MlDH重组菌的发酵与冻干酶粉的制备 | 第54页 |
| 5.3.4 MlDH最适pH的探究 | 第54-55页 |
| 5.3.5 MlDH温度稳定性的探究 | 第55页 |
| 5.3.6 辅酶循环辅助酶的选择 | 第55页 |
| 5.3.7 级联催化反应的放大 | 第55页 |
| 5.3.8 产物的提取与纯化 | 第55-56页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第56-60页 |
| 5.4.1 MlDH的纯化 | 第56页 |
| 5.4.2 MlDH最适pH的探究 | 第56-57页 |
| 5.4.3 MlDH的热稳定性探究 | 第57-58页 |
| 5.4.4 辅酶循环辅助酶的选择 | 第58-59页 |
| 5.4.5 三酶级联催化反应 | 第59页 |
| 5.4.6 产物的提取与纯化 | 第59-60页 |
| 5.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 结论与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 硕士在读期间撰写的论文和专利 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
