| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-30页 |
| 1.1 猪瘟与猪瘟病毒 | 第15-22页 |
| 1.1.1 猪瘟 | 第15-18页 |
| 1.1.2 猪瘟病毒 | 第18-19页 |
| 1.1.3 CSFV囊膜蛋白介导病毒吸附和入侵 | 第19-20页 |
| 1.1.4 非编码区(NCRs)和非结构蛋白(NSPs)调控病毒基因组复制与转录 | 第20-21页 |
| 1.1.5 病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用参与CSFV生命周期 | 第21-22页 |
| 1.1.6 CSFV感染诱导细胞凋亡及细胞生命周期改变 | 第22页 |
| 1.2 高通量转录组数据分析与应用 | 第22-27页 |
| 1.2.1 转录组测序方法与步骤 | 第23-24页 |
| 1.2.2 转录组测序的基因发掘 | 第24-25页 |
| 1.2.3 转录组学在CSFV研究中的应用 | 第25-27页 |
| 1.3 HES家族的研究进展 | 第27-29页 |
| 1.3.1 HES成员及蛋白结构 | 第27-28页 |
| 1.3.2 HES的功能研究 | 第28-29页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 CSFV强弱毒株诱导猪只宿主反应的综合分析 | 第30-43页 |
| 2.1 材料和方法 | 第30-34页 |
| 2.1.1 毒株、细胞 | 第30页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.1.3 主要试验材料及试剂配制 | 第30-31页 |
| 2.1.4 CSFV的增殖和滴度测定 | 第31页 |
| 2.1.5 实验猪感染和样品采集 | 第31页 |
| 2.1.6 组织病理学观察 | 第31页 |
| 2.1.7 白细胞计数 | 第31-32页 |
| 2.1.8 PBMCs分离试验 | 第32页 |
| 2.1.9 T淋巴细胞亚群检测 | 第32页 |
| 2.1.10 细胞凋亡检测 | 第32页 |
| 2.1.11 病毒载量检测 | 第32-33页 |
| 2.1.12 应用Luminex检测感染猪血清中细胞因子含量 | 第33页 |
| 2.1.13 应用ELISA检测感染猪血清中IFN-α含量 | 第33页 |
| 2.1.14 CSFV E2 抗体检测 | 第33-34页 |
| 2.1.15 数据展示 | 第34页 |
| 2.2 结果 | 第34-41页 |
| 2.2.1 实验猪感染后临床症状 | 第34-35页 |
| 2.2.2 实验猪感染后组织病理学变化 | 第35-36页 |
| 2.2.3 感染CSFV后外周白细胞和PBMCs凋亡的动态变化 | 第36-38页 |
| 2.2.4 感染CSFV后 CD4+、CD8+T 淋巴细胞变化 | 第38页 |
| 2.2.5 感染CSFV后血液和各组织中病毒载量 | 第38-39页 |
| 2.2.6 感染CSFV后细胞因子和趋化因子的动力学变化 | 第39-40页 |
| 2.2.7 CSFV感染后E2 抗体水平的检测 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 转录组测序及SiRNA筛选CSFV强弱毒株诱导的宿主差异转录分子 | 第43-53页 |
| 3.1 材料和方法 | 第43-45页 |
| 3.1.1 毒株、细胞 | 第43页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第43页 |
| 3.1.3 转录组测序 | 第43页 |
| 3.1.4 RNA干扰(RNAi)试验 | 第43-44页 |
| 3.1.5 细胞计数 | 第44页 |
| 3.1.6 细胞活力检测 | 第44页 |
| 3.1.7 荧光定量RT-PCR | 第44-45页 |
| 3.1.8 数据统计学分析 | 第45页 |
| 3.2 结果 | 第45-50页 |
| 3.2.1 转录组测序数据的生物信息学分析 | 第45-49页 |
| 3.2.2 应用RNAi筛选影响CSFV复制的宿主分子 | 第49-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 HES4抗CSFV分子机制的研究 | 第53-68页 |
| 4.1 材料和方法 | 第53-60页 |
| 4.1.1 毒株、细胞 | 第53页 |
| 4.1.2 相关试剂和实验仪器 | 第53-54页 |
| 4.1.3 质粒构建 | 第54-55页 |
| 4.1.4 细胞计数 | 第55-56页 |
| 4.1.5 细胞活力检测 | 第56页 |
| 4.1.6 稳定表达HES4的PAM细胞系的构建 | 第56-57页 |
| 4.1.7 RNA干扰(RNAi)试验 | 第57页 |
| 4.1.8 荧光定量RT-PCR | 第57-58页 |
| 4.1.9 病毒滴度检测 | 第58页 |
| 4.1.10 免疫印迹试验 | 第58页 |
| 4.1.11 双荧光素酶报告试验 | 第58-59页 |
| 4.1.12 体外转录 | 第59页 |
| 4.1.13 光敏生物素标记RNA | 第59-60页 |
| 4.1.14 RNA pulldown | 第60页 |
| 4.1.15 数据统计学分析 | 第60页 |
| 4.2 结果 | 第60-66页 |
| 4.2.1 HES4为CSFV强弱毒诱导的差异转录宿主分子 | 第60-61页 |
| 4.2.2 CSFV石门株感染促进HES4 的表达 | 第61-62页 |
| 4.2.3 HES4 负调控CSFV石门株的复制 | 第62-63页 |
| 4.2.4 HES4 不能激活IFN-β通路 | 第63-64页 |
| 4.2.5 HES4 抑制CSFV IRES活性 | 第64-65页 |
| 4.2.6 HES4与CSFV IRES相互作用 | 第65-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 全文结论 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 参考文献 | 第72-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 作者简历 | 第87页 |
