| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第12-25页 |
| 1.1 肺腺癌简介 | 第12-14页 |
| 1.2 SET基因简介 | 第14-16页 |
| 1.3 miRNA调控 | 第16-18页 |
| 1.4 miRNA功能研究技术与方法 | 第18-20页 |
| 1.5 肺腺癌中的miRNA研究 | 第20-21页 |
| 1.6 课题研究基础、目的意义及实验方案 | 第21-24页 |
| 1.6.1 课题研究基础 | 第21-22页 |
| 1.6.2 课题研究的目的意义 | 第22页 |
| 1.6.3 课题研究内容 | 第22-23页 |
| 1.6.4 技术路线 | 第23-24页 |
| 1.7 课题研究的创新点 | 第24-25页 |
| 第二章 目标miRNA的筛选及确定 | 第25-36页 |
| 2.1 前言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 细胞样品来源 | 第26页 |
| 2.2.2 主要试剂耗材 | 第26页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基和常用试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.3 方法 | 第28-32页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第28页 |
| 2.3.2 细胞冻存 | 第28页 |
| 2.3.3 细胞总RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.3.4 RNA的逆转录 | 第29-30页 |
| 2.3.5 miRNA引物设计合成 | 第30页 |
| 2.3.6 cDNA的实时PCR检测分析 | 第30-32页 |
| 2.4 结果 | 第32-34页 |
| 2.4.1 miRNAs的溶解曲线 | 第32页 |
| 2.4.2 5种细胞miRNAs的荧光定量结果 | 第32-34页 |
| 2.5 讨论 | 第34-35页 |
| 2.6 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 miRNA靶向调控SET的验证 | 第36-47页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 材料 | 第37-38页 |
| 3.2.1 主要试剂耗材 | 第37页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.3 方法 | 第38-43页 |
| 3.3.1 生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 3.3.2 双荧光报告载体构建 | 第39-42页 |
| 3.3.3 双荧光素报告载体转染 | 第42页 |
| 3.3.4 双荧光素酶活性检测 | 第42-43页 |
| 3.4 结果 | 第43-45页 |
| 3.4.1 载体和插入片段双酶切 | 第43页 |
| 3.4.2 菌落PCR鉴定重组质粒 | 第43-44页 |
| 3.4.3 测序鉴定PSicheck2重组基因表达载体 | 第44-45页 |
| 3.4.4 荧光素酶相对活性分析 | 第45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 3.6 小结 | 第46-47页 |
| 第四章 miR-21稳定干扰A549肺腺癌细胞的构建及验证 | 第47-60页 |
| 4.1 前言 | 第47页 |
| 4.2 材料 | 第47-49页 |
| 4.2.1 主要试剂耗材 | 第47-48页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第48-49页 |
| 4.3 方法 | 第49-54页 |
| 4.3.1 Hsa-miR21-5p干扰载体构建 | 第49页 |
| 4.3.2 载体plvx-shRNA2-puro双酶切 | 第49-50页 |
| 4.3.3 Has-miRNA-21干扰基因酶切 | 第50页 |
| 4.3.4 重组干扰载体的构建 | 第50页 |
| 4.3.5 连接产物转化 | 第50-51页 |
| 4.3.6 阳性克隆子质粒抽提与鉴定 | 第51页 |
| 4.3.7 TUD21基因干扰载体的鉴定 | 第51页 |
| 4.3.8 质粒提取 | 第51页 |
| 4.3.9 慢病毒包装 | 第51-52页 |
| 4.3.10 慢病毒的回收纯化 | 第52页 |
| 4.3.11 TUD21基因干扰慢病毒的滴度测定 | 第52-53页 |
| 4.3.12 A549细胞最佳Puromycin筛选浓度检测 | 第53页 |
| 4.3.13 A549细胞慢病毒感染 | 第53-54页 |
| 4.3.14 实时荧光定量PCR鉴定转染效果 | 第54页 |
| 4.4 结果 | 第54-57页 |
| 4.4.1 TUD21基因干扰载体的鉴定 | 第54-55页 |
| 4.4.2 测序结果 | 第55页 |
| 4.4.3 Plvx-TUD21转染293T细胞包装病毒 | 第55-56页 |
| 4.4.4 Plvx-TUD21慢病毒滴度检测 | 第56-57页 |
| 4.4.5 实时荧光定量PCR鉴定转染效果 | 第57页 |
| 4.5 讨论 | 第57-59页 |
| 4.6 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 稳定干扰抑制miR-21表达对A549细胞生物学性状的影响 | 第60-74页 |
| 5.1 前言 | 第60-61页 |
| 5.2 材料 | 第61-62页 |
| 5.2.1 主要试剂耗材 | 第61页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第61-62页 |
| 5.3 方法 | 第62-67页 |
| 5.3.1 细胞蛋白提取及定量 | 第62-63页 |
| 5.3.2 Westernblot检测SET蛋白在细胞中的表达情况 | 第63-64页 |
| 5.3.3 CCK8法检测细胞活性 | 第64-65页 |
| 5.3.3.1 绘制标准曲线 | 第64-65页 |
| 5.3.3.2 绘制生长曲线 | 第65页 |
| 5.3.4 细胞划痕实验 | 第65页 |
| 5.3.5 肿瘤细胞体外侵袭实验 | 第65-67页 |
| 5.4 结果 | 第67-71页 |
| 5.4.1 Westernblot结果 | 第67页 |
| 5.4.2 CCK8实验 | 第67-69页 |
| 5.4.2.1 绘制标准曲线 | 第67-68页 |
| 5.4.2.2 绘制生长曲线 | 第68-69页 |
| 5.4.3 划痕实验 | 第69-70页 |
| 5.4.4 Transwell实验 | 第70-71页 |
| 5.5 讨论 | 第71-73页 |
| 5.6 小结 | 第73-74页 |
| 全文结论及课题展望 | 第74-75页 |
| 附录：英文缩略词注释表 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 综述 | 第85-92页 |
| 参考文献 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 | 第93页 |
