| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第14-27页 |
| 1.1 关于PHLPP的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.1.1 PHLPP的结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PHLPP调节的信号通路 | 第15-16页 |
| 1.1.3 PHLPP在本课题组中之前的研究 | 第16-17页 |
| 1.2 B细胞的发育和功能 | 第17-18页 |
| 1.3 生发中心的形成 | 第18-22页 |
| 1.3.1 生发中心的B细胞 | 第19-20页 |
| 1.3.2 生发中心明区和暗区表型的差异 | 第20-22页 |
| 1.4 浆细胞的分化和生存 | 第22-25页 |
| 1.4.1 调控浆细胞分化的分子机制 | 第24-25页 |
| 1.5 滤泡性辅助T细胞在生发中心辅助B细胞参与免疫应答的过程 | 第25-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-48页 |
| 2.1 常用相关试剂和药品 | 第27-29页 |
| 2.1.1 流式相关以及细胞纯化相关的试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2 分子生化实验相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 基因型鉴定PCR引物和Real-time qPCR引物 | 第29页 |
| 2.2 常用实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.3 小鼠的基因型鉴定方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 基因组DNA的提取 | 第30页 |
| 2.3.2 聚合酶链反应 | 第30-32页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳分离DNA | 第32页 |
| 2.4 体内小鼠细胞的富集和刺激实验 | 第32-35页 |
| 2.4.1 用BD磁珠富集的方法进行初始CD4+T细胞富集 | 第32-33页 |
| 2.4.2 初始T细胞活化实验 | 第33-34页 |
| 2.4.3 初始B细胞的纯化 | 第34-35页 |
| 2.4.4 初始B细胞的活化 | 第35页 |
| 2.5 OVA/Alum/LPS免疫小鼠进行流式分析 | 第35-38页 |
| 2.5.1 OVA/Alum/LPS配制和小鼠的免疫 | 第35-36页 |
| 2.5.2 流式表型分析的准备工作 | 第36-37页 |
| 2.5.3 细胞的染色 | 第37-38页 |
| 2.6 NP-OVA免疫小鼠检测抗体滴度 | 第38-40页 |
| 2.6.1 NP-OVA免疫小鼠采血 | 第38-39页 |
| 2.6.2 酶联免疫吸附实验(ELISA)的过程和步骤: | 第39-40页 |
| 2.8 GCB细胞的体外分化实验 | 第40-42页 |
| 2.8.1 40LBIL-4和40LBIL-21的滋养层细胞的构建 | 第40-41页 |
| 2.8.2 稳定表达细胞系IL-4和IL-21细胞因子的流式染色 | 第41-42页 |
| 2.8.3 40LBIL-4和40LBIL-21诱导初始B细胞的分化 | 第42页 |
| 2.9 Ki-67的染色过程 | 第42-43页 |
| 2.10 RNA相关的实验方法 | 第43-45页 |
| 2.10.1 细胞中RNA的提取过程 | 第43页 |
| 2.10.2 mRNA逆转录成cDNA | 第43-44页 |
| 2.10.3 实时荧光定量PCR(Real-Time PCR) | 第44-45页 |
| 2.11 蛋白相关实验方法 | 第45-48页 |
| 2.11.1 细胞蛋白样品的制备 | 第45页 |
| 2.11.2 用BCA的方法测定蛋白浓度 | 第45-46页 |
| 2.11.3 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第46-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-72页 |
| 3.1 敲除小鼠的基因型鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2 PHLPP在不同组织中的表达水平 | 第49-50页 |
| 3.3 PHLPP在CD4~+T细胞中是诱导表达的 | 第50-51页 |
| 3.4 以OVA/Alum/LPS做为抗原免疫PHLPP基因敲除小鼠的结果 | 第51-55页 |
| 3.4.1 PHLPP的敲除影响了T_(FH)的分化 | 第51-53页 |
| 3.4.2 T_(FH)的减少并未使GCB和PC的分化受影响 | 第53-54页 |
| 3.4.3 T_(FH)的减少也未影响抗体的应答 | 第54-55页 |
| 3.5 PHLPP在B细胞中高表达 | 第55页 |
| 3.6 PHLPP在B细胞中是诱导表达的 | 第55-56页 |
| 3.7 PHLPP在生发中心B细胞和浆细胞中RNA的表达情况 | 第56-59页 |
| 3.7.1 生发中心B细胞体外诱导条件的优化 | 第56-58页 |
| 3.7.2 PHLPP在体外诱导的iGCB、iPC和体内产生的GCB、PC的表达情况 | 第58-59页 |
| 3.8 PHLPP1-/-PHLPP2fI/fICD19Cre小鼠的发育基本正常 | 第59-60页 |
| 3.9 PHLPP不影响OVA做为抗原的生发中心反应和浆细胞的分化 | 第60-62页 |
| 3.10 PHLPP对LCMV病毒感染过程中生发中心和浆细胞分化的影响 | 第62-64页 |
| 3.11 PHLPP不影响B细胞的活化 | 第64-65页 |
| 3.12 PHLPP在特定条件下会抑制B细胞的增殖 | 第65-67页 |
| 3.13 PHLPP的敲除促进增殖可能是因为PKC的磷酸化增加引起的 | 第67-68页 |
| 3.14 PHLPP缺陷B细胞在浆细胞分化过程中Blimp-1表达水平降低 | 第68页 |
| 3.15 PHLPP的敲除影响了抗体应答反应 | 第68-70页 |
| 3.16 分析与讨论 | 第70-72页 |
| 附录1 图表索引 | 第72-75页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
