| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第16-35页 |
| 1.1 心肌发育的调控 | 第18-20页 |
| 1.1.1 心肌发育的转录因子 | 第19-20页 |
| 1.2 RNA结合蛋白(RNABINDING PROTEIN) | 第20-26页 |
| 1.2.1 RNA结合蛋白的结构 | 第20-22页 |
| 1.2.2 RNA结合蛋白的功能 | 第22-23页 |
| 1.2.3 RNA结合蛋白在心肌细胞发育过程中的作用 | 第23-26页 |
| 1.3 RBM24基因 | 第26-31页 |
| 1.3.1 Rbm24基因的结构 | 第26-28页 |
| 1.3.2 Rbm24基因的功能及研究进展 | 第28-31页 |
| 1.3.2.1 Rbm24在肌节组装中发挥重要作用 | 第28-29页 |
| 1.3.2.2 Rbm24可作为剪接因子发挥功能 | 第29页 |
| 1.3.2.3 Rbm24调控mRNA的稳定性 | 第29-30页 |
| 1.3.2.4 Rbm24蛋白复合体的生理作用研究 | 第30-31页 |
| 1.4 STK38基因 | 第31-35页 |
| 1.4.1 Stk38简介 | 第31-32页 |
| 1.4.2 哺乳动物中Stk38的调节 | 第32页 |
| 1.4.3 哺乳动物中Stk38生物学功能及研究进展 | 第32-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 哺乳动物细胞株 | 第35页 |
| 2.1.2 抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.3 感受态与载体质粒 | 第36页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第36页 |
| 2.2 主要仪器与耗材 | 第36-38页 |
| 2.3 主要试剂 | 第38-40页 |
| 2.4 常用试剂配制 | 第40-42页 |
| 2.5 实验内容与方法 | 第42-64页 |
| 2.5.1 基因真核表达质粒的构建 | 第42-50页 |
| 2.5.1.1 基因组总RNA提取 | 第42-43页 |
| 2.5.1.2 RNA反转录合成cDNA模板 | 第43页 |
| 2.5.1.3 由cDNA为模板PCR扩增目的基因 | 第43-44页 |
| 2.5.1.4 PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 2.5.1.5 琼脂糖凝胶回收目的DNA片段 | 第45-46页 |
| 2.5.1.6 酶切载体片段和DNA纯化产物 | 第46-47页 |
| 2.5.1.7 酶切反应液或PCR反应液回收DNA | 第47页 |
| 2.5.1.8 酶切载体去磷酸化处理 | 第47页 |
| 2.5.1.9 连接目的片段与线性载体 | 第47-48页 |
| 2.5.1.10 DNA的化学转化 | 第48-49页 |
| 2.5.1.11 质粒DNA小量提取 | 第49-50页 |
| 2.5.2 细胞相关实验和方法 | 第50-55页 |
| 2.5.2.1 细胞复苏 | 第50-51页 |
| 2.5.2.2 细胞传代 | 第51-52页 |
| 2.5.2.3 细胞冻存 | 第52-53页 |
| 2.5.2.4 细胞计数 | 第53页 |
| 2.5.2.5 细胞转染 | 第53-55页 |
| 2.5.2.5.1 PEI转染法 | 第53-54页 |
| 2.5.2.5.2 电转染法 | 第54-55页 |
| 2.5.3 蛋白免疫印迹(Western Blot)分析 | 第55-57页 |
| 2.5.3.1 细胞内总蛋白提取 | 第55-56页 |
| 2.5.3.2 BCA法检测蛋白浓度 | 第56页 |
| 2.5.3.3 免疫印迹试验 | 第56-57页 |
| 2.5.4 蛋白银染 | 第57-58页 |
| 2.5.5 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation) | 第58-59页 |
| 2.5.6 细胞免疫荧光染色 | 第59-60页 |
| 2.5.7 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2.5.8 慢病毒相关操作 | 第61-63页 |
| 2.5.7.1 慢病毒包装 | 第61-62页 |
| 2.5.7.2 病毒滴度检测 | 第62-63页 |
| 2.5.7.3 细胞感染与细胞系筛选 | 第63页 |
| 2.5.9 统计学分析 | 第63-64页 |
| 第三章 结果与分析 | 第64-82页 |
| 3.1 蛋白质谱分析与RBM24结合的蛋白 | 第64-65页 |
| 3.1.1 蛋白质银染寻找与Rbm24相互作用的蛋白 | 第64-65页 |
| 3.2 STK38表达载体的构建 | 第65-68页 |
| 3.2.1 Stk38基因的扩增 | 第65-66页 |
| 3.2.2 Stk38表达载体克隆鉴定 | 第66-67页 |
| 3.2.3 Stk38表达载体蛋白真核系统表达鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3 STK38与RBM24相互作用 | 第68-70页 |
| 3.3.1 外源性Stk38与外源性Rbm24相互作用 | 第68页 |
| 3.3.2 内源性Stk38与外源性Rbm24相互作用 | 第68-69页 |
| 3.3.3 内源性Stk38与内源性Rbm24相互作用 | 第69-70页 |
| 3.4 RBM24与STK38的直接相互作用 | 第70-71页 |
| 3.5 细胞中RBM24与STK38的定位 | 第71-72页 |
| 3.6 STK38与RBM24结构域相互作用检测 | 第72-76页 |
| 3.6.1 Stk38与Rbm24不同功能域相互作用的检验 | 第73-74页 |
| 3.6.2 Rbm24片段拆分构想 | 第74页 |
| 3.6.3 Rbm24拆分片段的构建 | 第74-75页 |
| 3.6.4 Rbm24拆分片段的表达验证 | 第75-76页 |
| 3.6.5 Stk38与Rbm24拆分片段相互作用检测 | 第76页 |
| 3.7 HL-1-SHSTK38敲低细胞系的构建 | 第76-80页 |
| 3.7.1 筛选有效的shSk38慢病毒表达载体 | 第77页 |
| 3.7.2 shStk38慢病毒包装及病毒滴度检验 | 第77-79页 |
| 3.7.3 HL-1 shStk38稳定细胞株构建 | 第79-80页 |
| 3.8 STK38影响RBM24及肌节相关基因表达的检测 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-85页 |
| 第五章 结论 | 第85-86页 |
| 附录 图表索引 | 第86-87页 |
| 附录 引物列表 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
