| 致谢 | 第4-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 葡聚糖的特点及分类 | 第11页 |
| 1.2 葡聚糖酶的特点及研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 β-1,3-葡聚糖酶基因分类及功能 | 第11-12页 |
| 1.2.2 β-1,3-葡聚糖酶基因功能研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.2.1 β-1,3-葡聚糖酶基因在生长、发育和生殖方面的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.2.2 β-1,3-葡聚糖酶基因在抗逆性方面的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.2.3 β-1,3-葡聚糖酶基因的可诱导性研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 ZmEGP基因的克隆及表达分析 | 第17-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1.1 田间材料种植和取样方法 | 第17页 |
| 2.1.2 差异蛋白库的构建及目的基因的挑选 | 第17页 |
| 2.1.3 目的基因cDNA的克隆方法 | 第17-22页 |
| 2.1.3.1 引物设计和PCR扩增 | 第17-18页 |
| 2.1.3.2 PCR扩增产物的纯化和连接 | 第18-19页 |
| 2.1.3.3 转化 | 第19-20页 |
| 2.1.3.4 阳性克隆的筛选与检测 | 第20页 |
| 2.1.3.5 重组质粒的提取与鉴定 | 第20-21页 |
| 2.1.3.6 酶切拼接获得ZmEGP基因 | 第21-22页 |
| 2.1.4 ZmEGP基因cDNA序列的测定和分析方法 | 第22页 |
| 2.1.5 ZmEGP基因功能的生物信息学分析方法 | 第22-23页 |
| 2.1.6 ZmEGP基因的表达分析方法 | 第23-26页 |
| 2.1.6.1 试剂与仪器 | 第23页 |
| 2.1.6.2 总RNA的提取与纯化和cDNA第一链的合成 | 第23-25页 |
| 2.1.6.3 荧光定量PCR | 第25-26页 |
| 2.1.7 ZmEGP基因组序列的克隆及分析 | 第26-28页 |
| 2.1.7.1 玉米叶片DNA的提取 | 第27页 |
| 2.1.7.2 基因组序列的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-38页 |
| 2.2.1 ZmEGP基因CDS的克隆及分析 | 第28-29页 |
| 2.2.2 ZmEGP蛋白的结构域和理化性质分析 | 第29-33页 |
| 2.2.2.1 ZmEGP蛋白的结构域分析 | 第30页 |
| 2.2.2.2 ZmEGP蛋白的系统进化分析 | 第30-31页 |
| 2.2.2.3 ZmEGP蛋白的理化性质分析 | 第31-32页 |
| 2.2.2.4 ZmEGP蛋白的亲/疏水性分析 | 第32-33页 |
| 2.2.2.5 ZmEGP蛋白的信号肽预测与分析 | 第33页 |
| 2.2.3 ZmEGP蛋白的亚细胞定位预测和染色体初步定位预测 | 第33-34页 |
| 2.2.4 ZmEGP蛋白的跨膜结构分析 | 第34-35页 |
| 2.2.5 ZmEGP蛋白的磷酸化位点预测 | 第35页 |
| 2.2.6 ZmEGP蛋白质二级结构预测 | 第35-37页 |
| 2.2.7 ZmEGP蛋白质三级结构预测 | 第37页 |
| 2.2.8 ZmEGP基因的荧光定量表达分析 | 第37-38页 |
| 2.3 ZmEGP基因组序列分析 | 第38-40页 |
| 第三章 pEASY-ZmEGP重组蛋白的原核表达及Western Blot分析 | 第40-48页 |
| 3.1 pEASY-ZmEGP重组蛋白的原核表达 | 第40-44页 |
| 3.1.1 试剂 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂的配制 | 第40-41页 |
| 3.1.3 方法 | 第41-43页 |
| 3.1.3.1 ZmEGP蛋白原核表达载体的构建 | 第41页 |
| 3.1.3.2 ZmEGP蛋白的原核诱导表达 | 第41-42页 |
| 3.1.3.3 SDS-PAGE检测 | 第42-43页 |
| 3.1.4 结果与分析 | 第43-44页 |
| 3.1.4.1 ORF序列的扩增及重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.4.2 pEASY-ZmEGP重组蛋白的表达 | 第44页 |
| 3.2 Western Blot分析 | 第44-48页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.1.1 主要试剂的配制 | 第44-45页 |
| 3.2.2 方法 | 第45-46页 |
| 3.2.3 结果与分析 | 第46-48页 |
| 第四章 ZmEGP基因的表达载体构建及转基因 | 第48-56页 |
| 4.1 超表达载体和RNAi载体的构建 | 第48-51页 |
| 4.1.1 超表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 4.1.1.1 材料与试剂 | 第48页 |
| 4.1.1.2 方法 | 第48-50页 |
| 4.1.2 RNAi载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.1.2.1 材料与试剂 | 第50页 |
| 4.1.2.2 方法 | 第50-51页 |
| 4.2 农杆菌介导法遗传转化拟南芥 | 第51-54页 |
| 4.2.1 T-DNA插入突变体纯合度检测 | 第51页 |
| 4.2.2 农杆菌介导超表达载体转化拟南芥 | 第51-52页 |
| 4.2.3 转基因检测 | 第52-53页 |
| 4.2.4 转基因拟南芥的粒重表现 | 第53页 |
| 4.2.5 转基因植株的逆境处理与分析 | 第53-54页 |
| 4.3 ZmEGP基因对宿主细胞的影响 | 第54-56页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第56-60页 |
| 5.1 结论 | 第56-57页 |
| 5.1.1 ZmEGP在2个玉米自交系间存在差异 | 第56页 |
| 5.1.2 ZmEGP蛋白属于GH17家族 | 第56页 |
| 5.1.3 ZmEGP与近缘物种序列同源性高 | 第56页 |
| 5.1.4 ZmEGP基因表达无组织特异性 | 第56页 |
| 5.1.5 ZmEGP基因可在体外被诱导表达蛋白 | 第56-57页 |
| 5.1.6 转ZmEGP基因拟南芥耐盐性提高 | 第57页 |
| 5.2 讨论 | 第57-60页 |
| 5.2.1 关于基因克隆 | 第57页 |
| 5.2.2 关于原核表达 | 第57-58页 |
| 5.2.3 关于基因功能分析 | 第58-59页 |
| 5.2.4 进一步研究设想 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| Abstract | 第67-68页 |
