| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第12-28页 |
| 1 神经元突起生长发育与再生方式 | 第12-14页 |
| 2 细胞骨架在神经元突起生长中的作用 | 第14-15页 |
| 3 微管运动的调控神经元突起的生长 | 第15-21页 |
| 3.1 微管的结构特点 | 第15-16页 |
| 3.2 微管C末端是微管翻译后修饰的重要结构 | 第16-17页 |
| 3.3 微管蛋白翻译后修饰 | 第17-18页 |
| 3.4 微管的运动与新生突起的关系 | 第18-21页 |
| 4 微管切割蛋白spastin | 第21-25页 |
| 4.1 Spastin的概述 | 第21-22页 |
| 4.2 Spastin与微管的关系 | 第22-23页 |
| 4.3 Spastin与神经元突起生长的关系 | 第23页 |
| 4.4 Spastin与微管修饰对神经元分支的影响 | 第23-25页 |
| 5 SUMO化蛋白的修饰 | 第25-27页 |
| 6 本研究的目的及其意义 | 第27-28页 |
| 实验材料和方法 | 第28-42页 |
| 1 实验材料 | 第28页 |
| 1.1 实验动物 | 第28页 |
| 1.2 细菌菌株、细胞株 | 第28页 |
| 2 主要试剂、工具和试剂盒 | 第28-33页 |
| 2.1 分子克隆相关试剂 | 第28-29页 |
| 2.2 细胞培养相关试剂和工具 | 第29-30页 |
| 2.3 蛋白检测相关试剂 | 第30页 |
| 2.4 一般试剂的配制 | 第30-32页 |
| 2.5 主要的仪器设备 | 第32-33页 |
| 3 试验方法 | 第33-41页 |
| 3.1 质粒的构建与大量提取 | 第33-34页 |
| 3.1.1 质粒的构建 | 第33页 |
| 3.1.2 质粒的大量制备 | 第33-34页 |
| 3.2 细胞的培养与转染 | 第34-36页 |
| 3.2.1 细胞的传代与冻存 | 第34-35页 |
| 3.2.2 细胞的复苏 | 第35页 |
| 3.2.3 细胞转染(Lipofectamine 2000转染或钙磷转染) | 第35-36页 |
| 3.3 GST融合蛋白Pull down分析及免疫印迹实验(Western Blot))检测 | 第36-39页 |
| 3.3.1 GST融合蛋白的表达与纯化 | 第36-37页 |
| 3.3.2 Pull down分析 | 第37页 |
| 3.3.3 免疫印迹实验(Western Blot))检测 | 第37-39页 |
| 3.4 免疫细胞化学(ICC)染色 | 第39-40页 |
| 3.5 免疫共沉淀(CO-IP)分析及检测 | 第40-41页 |
| 3.5.1 样品的收集 | 第40页 |
| 3.5.2 BCA蛋白定量 | 第40-41页 |
| 3.5.3 免疫共沉淀(co-IP) | 第41页 |
| 3.5.4 免疫印迹实验(Western Blot))检测：具体同上 | 第41页 |
| 3.6 双分子荧光互补(BiFC)技术 | 第41页 |
| 4 数据统计与分析 | 第41-42页 |
| 结果与分析 | 第42-67页 |
| 1 Spastin的SUMO化位点预测 | 第42页 |
| 2 构建Spastin突变体的原核、真核重组表达载体 | 第42-44页 |
| 3 Spastin和GST-SUMO融合蛋白pull down分析 | 第44-45页 |
| 4 Spastin与SUMO的CO-IP分析 | 第45-46页 |
| 5 Spastin和SUMO蛋白共定位 | 第46-47页 |
| 6 双分子荧光共定位分析Spastin和SUMO相互作用 | 第47-48页 |
| 7 Spastin突变体的生物学性能变化 | 第48-50页 |
| 8 Spastin K427R及Spastin K427A突变体的无微管切割活性 | 第50页 |
| 9 Spastin突变体的生物学性能变化 | 第50-51页 |
| 10 Spastin突变体的对神经生长的影响 | 第51-52页 |
| 11 Spastin的SUMO化修饰对微管切割的影响 | 第52-55页 |
| 12 Spastin K427R可与微管蛋白发生相互作用 | 第55-56页 |
| 13 Spastin K427R突变体影响微管的聚合与解聚 | 第56-57页 |
| 14 TTLL4及TTLL6促进COS1细胞微管glu和poly glu化修饰 | 第57-58页 |
| 15 HDAC6抑制COS1细胞微管ACE化修饰 | 第58-59页 |
| 16 Spastin K427R对微管的修饰的影响 | 第59-62页 |
| 17 Spastin K427R对海马神经元生长发育的影响 | 第62-64页 |
| 18 微管翻译后修饰调控spastin切割的活性 | 第64-65页 |
| 19 微管的修饰影响spastin对神经元生长的影响 | 第65-67页 |
| 讨论 | 第67-76页 |
| 1 Spastin SUMO化修饰的验证 | 第68-69页 |
| 2 Spastin的SUMO修饰化位点探索及其微管切割功能的影响 | 第69页 |
| 3 Spastin的SUMO修饰对神经元突起的生长 | 第69-70页 |
| 4 SUMO修饰对spastin切割活性的影响 | 第70-71页 |
| 5 Spastin K427R与微管蛋白相结合 | 第71页 |
| 6 Spastin K427R介导微管的动态性抑制突起 | 第71-73页 |
| 7 Spastin K427R抑制spastin的微管切割活性 | 第73-74页 |
| 8 Spastin K427R抑制spastin的促神经元分支作用 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-89页 |
| 微管蛋白翻译后修饰：神经元微管骨架的编码功能(综述) | 第89-104页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 主要中英文缩略词表 | 第104-105页 |
| 在读期间申请及参与的课题 | 第105-106页 |
| 在读期间发表的论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
