| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第13-16页 |
| 第1章 引言 | 第16-32页 |
| 1.1 腺病毒载体简介 | 第16-22页 |
| 1.1.1 腺病毒载体基本概况 | 第16-20页 |
| 1.1.2 条件复制型腺病毒在肿瘤治疗中的应用 | 第20-21页 |
| 1.1.3 条件复制型腺病毒在肿瘤治疗中的不足 | 第21-22页 |
| 1.2 间充质干细胞简介 | 第22-26页 |
| 1.2.1 间充质干细胞的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.2.2 间充质干细胞作为肿瘤基因治疗载体的应用 | 第23-25页 |
| 1.2.3 间充质干细胞装载腺病毒用于体内治疗所存在的问题 | 第25-26页 |
| 1.3 基因表达调控系统简介 | 第26-29页 |
| 1.3.1 常用的基因表达调控系统的分类 | 第26-27页 |
| 1.3.2 四环素调控系统简介 | 第27-28页 |
| 1.3.3 四环素调控系统的应用 | 第28-29页 |
| 1.4 腺病毒复制调控的策略 | 第29-30页 |
| 1.4.1 条件复制型腺病毒载体的复制调控手段 | 第29页 |
| 1.4.2 四环素调控系统对溶瘤腺病毒的复制调控研究进展 | 第29-30页 |
| 1.5 课题研究意义 | 第30-32页 |
| 第2章 病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒载体的构建及体外实验研究 | 第32-78页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-36页 |
| 2.1.1 菌株 | 第33页 |
| 2.1.2 细胞与病毒 | 第33页 |
| 2.1.3 载体和主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第34-35页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-50页 |
| 2.2.1 载体构建相关实验方法 | 第36-39页 |
| 2.2.2 构建病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒穿梭载体 | 第39-44页 |
| 2.2.3 构建病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒骨架载体 | 第44-45页 |
| 2.2.4 Luciferase报告基因载体构建 | 第45页 |
| 2.2.5 E1A基因表达载体的构建 | 第45页 |
| 2.2.6 腺病毒的包装和纯化 | 第45-47页 |
| 2.2.7 小鼠mMSC细胞的分离 | 第47页 |
| 2.2.8 腺病毒感染目的细胞 | 第47页 |
| 2.2.9 细胞基因组DNA提取 | 第47-48页 |
| 2.2.10 Real-Time PCR测定病毒基因组复制倍数 | 第48-49页 |
| 2.2.11 Luciferase活力检测 | 第49-50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-69页 |
| 2.3.1 E1A D24与E1B-△55KD基因片段克隆结果鉴定 | 第50-51页 |
| 2.3.2 病毒复制受激活型Tet-on调控的腺病毒穿梭载体鉴定 | 第51-54页 |
| 2.3.3 病毒复制受激活型Tet-on调控的腺病毒载体的同源重组 | 第54-58页 |
| 2.3.4 三种激活型Tet-on调控载体的性能检测 | 第58-59页 |
| 2.3.5 腺病毒的包装与活力检测 | 第59-60页 |
| 2.3.6 荧光显微镜下观察感染腺病毒的细胞状态 | 第60-61页 |
| 2.3.7 感染腺病毒细胞的基因组提取 | 第61-62页 |
| 2.3.8 腺病毒基因组在不同细胞中的复制检测 | 第62-64页 |
| 2.3.9 E1基因对Tet调控系统的影响 | 第64-69页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第69-78页 |
| 第3章 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒的构建及体外实验研究 | 第78-102页 |
| 3.1 实验材料及试剂配制 | 第79-80页 |
| 3.1.1 菌株 | 第79页 |
| 3.1.2 载体及所用试剂 | 第79页 |
| 3.1.3 细胞株、病毒以及培养基 | 第79页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第79-80页 |
| 3.2 实验方法 | 第80-83页 |
| 3.2.1 载体构建 | 第80页 |
| 3.2.2 病毒包装与活力检测 | 第80-81页 |
| 3.2.3 Luciferase活力检测 | 第81页 |
| 3.2.4 腺病毒对细胞的感染 | 第81-82页 |
| 3.2.5 细胞基因组的提取 | 第82页 |
| 3.2.6 Real-Time PCR测定病毒基因组复制倍数 | 第82页 |
| 3.2.7 MTT法检测腺病毒对肿瘤细胞的增殖抑制效果 | 第82页 |
| 3.2.8 Transwell实验检测间充质干细胞的迁移活力 | 第82-83页 |
| 3.3 实验结果 | 第83-95页 |
| 3.3.0 TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒载体鉴定 | 第83-84页 |
| 3.3.1 转录抑制型和激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒载体在细胞内的本底表达比较 | 第84-85页 |
| 3.3.2 两种TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒的包装与活力检测 | 第85-86页 |
| 3.3.3 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒在多种细胞中的复制检测 | 第86-91页 |
| 3.3.4 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒对MDA-MB-231细胞的增殖抑制 | 第91-92页 |
| 3.3.5 装载腺病毒的MSC的迁移活力 | 第92-95页 |
| 3.4 分析与讨论 | 第95-102页 |
| 第4章 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒在乳腺癌荷瘤模型中的实验治疗研究 | 第102-116页 |
| 4.1 实验材料 | 第103-104页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第103页 |
| 4.1.2 细胞系,病毒以及培养试剂 | 第103页 |
| 4.1.3 实验主要试剂及配制 | 第103-104页 |
| 4.1.4 实验主要仪器设备 | 第104页 |
| 4.2 实验方法 | 第104-108页 |
| 4.2.1 MDA-MB-231-Luc细胞的荷瘤小鼠建立 | 第104-105页 |
| 4.2.2 活体成像系统观察肿瘤生长 | 第105页 |
| 4.2.3 hMSC装载腺病毒 | 第105页 |
| 4.2.4 荷瘤小鼠瘤内注射腺病毒或感染腺病毒的hMSC | 第105-106页 |
| 4.2.5 肿瘤石蜡切片制作 | 第106-107页 |
| 4.2.6 组织H&E染色 | 第107页 |
| 4.2.7 免疫组织化学染色 | 第107-108页 |
| 4.3 实验结果 | 第108-113页 |
| 4.3.1 Luciferase反映肿瘤生长情况 | 第108-109页 |
| 4.3.2 H&E染色及免疫组化检测病毒对肿瘤的感染效果 | 第109-111页 |
| 4.3.3 小鼠肿瘤生长曲线 | 第111-113页 |
| 4.4 分析与讨论 | 第113-116页 |
| 结论 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-132页 |
| 附录 | 第132-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 攻读博士期间科研成果 | 第146-147页 |
