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间充质干细胞装载病毒复制受Tet-on调控的条件复制型腺病毒在乳腺癌荷瘤鼠模型中的治疗研究

摘要第3-6页
Abstract第6-8页
英文缩略词表第13-16页
第1章 引言第16-32页
    1.1 腺病毒载体简介第16-22页
        1.1.1 腺病毒载体基本概况第16-20页
        1.1.2 条件复制型腺病毒在肿瘤治疗中的应用第20-21页
        1.1.3 条件复制型腺病毒在肿瘤治疗中的不足第21-22页
    1.2 间充质干细胞简介第22-26页
        1.2.1 间充质干细胞的研究现状第22-23页
        1.2.2 间充质干细胞作为肿瘤基因治疗载体的应用第23-25页
        1.2.3 间充质干细胞装载腺病毒用于体内治疗所存在的问题第25-26页
    1.3 基因表达调控系统简介第26-29页
        1.3.1 常用的基因表达调控系统的分类第26-27页
        1.3.2 四环素调控系统简介第27-28页
        1.3.3 四环素调控系统的应用第28-29页
    1.4 腺病毒复制调控的策略第29-30页
        1.4.1 条件复制型腺病毒载体的复制调控手段第29页
        1.4.2 四环素调控系统对溶瘤腺病毒的复制调控研究进展第29-30页
    1.5 课题研究意义第30-32页
第2章 病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒载体的构建及体外实验研究第32-78页
    2.1 实验材料第33-36页
        2.1.1 菌株第33页
        2.1.2 细胞与病毒第33页
        2.1.3 载体和主要试剂第33-34页
        2.1.4 主要溶液配制第34-35页
        2.1.5 主要仪器设备第35-36页
    2.2 实验方法第36-50页
        2.2.1 载体构建相关实验方法第36-39页
        2.2.2 构建病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒穿梭载体第39-44页
        2.2.3 构建病毒复制受rtTA介导的转录激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒骨架载体第44-45页
        2.2.4 Luciferase报告基因载体构建第45页
        2.2.5 E1A基因表达载体的构建第45页
        2.2.6 腺病毒的包装和纯化第45-47页
        2.2.7 小鼠mMSC细胞的分离第47页
        2.2.8 腺病毒感染目的细胞第47页
        2.2.9 细胞基因组DNA提取第47-48页
        2.2.10 Real-Time PCR测定病毒基因组复制倍数第48-49页
        2.2.11 Luciferase活力检测第49-50页
    2.3 实验结果第50-69页
        2.3.1 E1A D24与E1B-△55KD基因片段克隆结果鉴定第50-51页
        2.3.2 病毒复制受激活型Tet-on调控的腺病毒穿梭载体鉴定第51-54页
        2.3.3 病毒复制受激活型Tet-on调控的腺病毒载体的同源重组第54-58页
        2.3.4 三种激活型Tet-on调控载体的性能检测第58-59页
        2.3.5 腺病毒的包装与活力检测第59-60页
        2.3.6 荧光显微镜下观察感染腺病毒的细胞状态第60-61页
        2.3.7 感染腺病毒细胞的基因组提取第61-62页
        2.3.8 腺病毒基因组在不同细胞中的复制检测第62-64页
        2.3.9 E1基因对Tet调控系统的影响第64-69页
    2.4 分析与讨论第69-78页
第3章 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒的构建及体外实验研究第78-102页
    3.1 实验材料及试剂配制第79-80页
        3.1.1 菌株第79页
        3.1.2 载体及所用试剂第79页
        3.1.3 细胞株、病毒以及培养基第79页
        3.1.4 主要溶液配制第79-80页
    3.2 实验方法第80-83页
        3.2.1 载体构建第80页
        3.2.2 病毒包装与活力检测第80-81页
        3.2.3 Luciferase活力检测第81页
        3.2.4 腺病毒对细胞的感染第81-82页
        3.2.5 细胞基因组的提取第82页
        3.2.6 Real-Time PCR测定病毒基因组复制倍数第82页
        3.2.7 MTT法检测腺病毒对肿瘤细胞的增殖抑制效果第82页
        3.2.8 Transwell实验检测间充质干细胞的迁移活力第82-83页
    3.3 实验结果第83-95页
        3.3.0 TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒载体鉴定第83-84页
        3.3.1 转录抑制型和激活型Tet-on调控的条件复制型腺病毒载体在细胞内的本底表达比较第84-85页
        3.3.2 两种TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒的包装与活力检测第85-86页
        3.3.3 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒在多种细胞中的复制检测第86-91页
        3.3.4 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on调控的条件复制型腺病毒对MDA-MB-231细胞的增殖抑制第91-92页
        3.3.5 装载腺病毒的MSC的迁移活力第92-95页
    3.4 分析与讨论第95-102页
第4章 病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒在乳腺癌荷瘤模型中的实验治疗研究第102-116页
    4.1 实验材料第103-104页
        4.1.1 实验动物第103页
        4.1.2 细胞系,病毒以及培养试剂第103页
        4.1.3 实验主要试剂及配制第103-104页
        4.1.4 实验主要仪器设备第104页
    4.2 实验方法第104-108页
        4.2.1 MDA-MB-231-Luc细胞的荷瘤小鼠建立第104-105页
        4.2.2 活体成像系统观察肿瘤生长第105页
        4.2.3 hMSC装载腺病毒第105页
        4.2.4 荷瘤小鼠瘤内注射腺病毒或感染腺病毒的hMSC第105-106页
        4.2.5 肿瘤石蜡切片制作第106-107页
        4.2.6 组织H&E染色第107页
        4.2.7 免疫组织化学染色第107-108页
    4.3 实验结果第108-113页
        4.3.1 Luciferase反映肿瘤生长情况第108-109页
        4.3.2 H&E染色及免疫组化检测病毒对肿瘤的感染效果第109-111页
        4.3.3 小鼠肿瘤生长曲线第111-113页
    4.4 分析与讨论第113-116页
结论第116-118页
参考文献第118-132页
附录第132-144页
致谢第144-146页
攻读博士期间科研成果第146-147页

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