| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第17-19页 |
| 第一章 前言 | 第19-24页 |
| 1.1 肺癌 | 第19-20页 |
| 1.1.1 肺癌的危害 | 第19页 |
| 1.1.2 肺癌的治疗 | 第19-20页 |
| 1.2 ras基因 | 第20-21页 |
| 1.2.1 ras基因的致癌机制 | 第20-21页 |
| 1.2.2 Ras相关肿瘤的治疗策略 | 第21页 |
| 1.3 腺病毒载体与基因治疗 | 第21-22页 |
| 1.4 CIK细胞 | 第22-23页 |
| 1.5 课题前期工作 | 第23页 |
| 1.6 本课题研究意义 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1 病毒及细胞株 | 第24页 |
| 2.2 主要试剂及耗材 | 第24-25页 |
| 2.3 主要仪器 | 第25-28页 |
| 第三章 实验方法 | 第28-59页 |
| 3.1 A549细胞中ras蛋白及CD46的表达 | 第28-36页 |
| 3.1.1 A549细胞的扩增 | 第28-29页 |
| 3.1.2 A549细胞ras基因扩增 | 第29-33页 |
| 3.1.3 A549细胞ras基因测序 | 第33页 |
| 3.1.4 免疫荧光检测A549细胞中ras蛋白的表达 | 第33-35页 |
| 3.1.5 免疫组化检测A549细胞中CD46蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 3.2 肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV500的扩增、纯化及滴度测定 | 第36-43页 |
| 3.2.1 KGHV500的扩增 | 第36-39页 |
| 3.2.1.1 HEK293细胞复苏 | 第36-37页 |
| 3.2.1.2 HEK293细胞传代 | 第37-39页 |
| 3.2.1.3 重组腺病毒KGHV500的扩增 | 第39页 |
| 3.2.2 重组腺病毒KGHV500的纯化 | 第39-42页 |
| 3.2.3 重组腺病毒KGHV500的滴度测定 | 第42-43页 |
| 3.3 重组腺病毒KGHV500感染A549最佳MOI值测定 | 第43-44页 |
| 3.4 重组腺病毒KGHV500感染A549的透射电镜观察 | 第44-45页 |
| 3.5 划痕实验——重组腺病毒KGHV500对A549迁移的影响 | 第45页 |
| 3.6 MTT实验——重组腺病毒KGHV500对A549增殖的影响 | 第45-46页 |
| 3.7 TUNEL实验——重组腺病毒KGHV500对A549凋亡的影响 | 第46-47页 |
| 3.7.1:KGHV500感染A549细胞蜡块的制作 | 第46-47页 |
| 3.7.2:荧光显色过程 | 第47页 |
| 3.8 CIK细胞的培养与鉴定 | 第47-49页 |
| 3.8.1:CIK细胞的培养 | 第48-49页 |
| 3.8.2:CIK细胞的鉴定 | 第49页 |
| 3.9 重组腺病毒KGHV500感染CIK细胞的效率测定 | 第49-50页 |
| 3.10 肺腺癌裸鼠移植瘤模型的建立 | 第50页 |
| 3.11 KGHV500+CIK抗肿瘤治疗 | 第50-51页 |
| 3.12 免疫组化检测KGHV500+CIK对肺腺癌裸鼠移植瘤的靶向性 | 第51-53页 |
| 3.13 免疫组化检测单链抗体在肺腺癌裸鼠移植瘤中的表达 | 第53-54页 |
| 3.14 WB实验检测单链抗体在肺腺癌裸鼠中的表达 | 第54-57页 |
| 3.14.1 组织中总蛋白的提取 | 第56页 |
| 3.14.2 SDS-PAGE电泳 | 第56-57页 |
| 3.14.3 转膜 | 第57页 |
| 3.14.4 免疫反应 | 第57页 |
| 3.15 TUNEL实验检测各组肿瘤组织凋亡 | 第57-59页 |
| 第四章 实验结果 | 第59-80页 |
| 4.1 A549细胞中ras蛋白及CD46的表达 | 第59-61页 |
| 4.1.1 A549细胞的培养 | 第59页 |
| 4.1.2 A549细胞ras基因外显子的扩增 | 第59页 |
| 4.1.3 A549细胞ras基因外显子测序 | 第59-60页 |
| 4.1.4 A549细胞中ras蛋白的表达 | 第60-61页 |
| 4.1.5 A549细胞中CD46蛋白的表达 | 第61页 |
| 4.2 肿瘤特异性增殖腺病毒KGHV500的扩增、纯化及滴度测定 | 第61-64页 |
| 4.2.1 HEK293细胞的培养 | 第61-62页 |
| 4.2.2 重组腺病毒KGHV500的扩增 | 第62页 |
| 4.2.3 重组腺病毒KGHV500的纯化 | 第62-63页 |
| 4.2.4 重组腺病毒KGHV500的滴度测定 | 第63-64页 |
| 4.3 重组腺病毒KGHV500感染A549细胞最佳MOI值测定 | 第64-65页 |
| 4.4 重组腺病毒KGHV500感染A549的透射电镜观察 | 第65页 |
| 4.5 划痕实验——重组腺病毒KGHV500对A549迁移的影响 | 第65-66页 |
| 4.6 MTT实验——重组腺病毒KGHV500对A549增殖的影响 | 第66-67页 |
| 4.7 TUNEL实验——重组腺病毒KGHV500对A549凋亡的影响 | 第67-68页 |
| 4.8 CIK的培养与鉴定 | 第68-69页 |
| 4.9 KGHV500感染CIK细胞的效率 | 第69-70页 |
| 4.10 肺腺癌裸鼠移植瘤模型的建立 | 第70页 |
| 4.11 治疗效果的检测 | 第70-72页 |
| 4.12 KGHV500+CIK治疗裸鼠移植瘤靶向性检测 | 第72-77页 |
| 4.13 单链抗体在肺腺癌裸鼠移植瘤中的表达 | 第77-79页 |
| 4.14 TUNEL实验检测各组肿瘤组织凋亡 | 第79-80页 |
| 第五章 讨论 | 第80-82页 |
| 第六章 创新与不足 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 附录 攻读硕士期间发表论文 | 第87页 |
