| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-18页 |
| 绪论 | 第18-25页 |
| ·肿瘤多药耐药的研究进展 | 第18页 |
| ·多药耐药相关蛋白1(MRP1)的概述 | 第18-21页 |
| ·MRP1的基本结构、表达和功能 | 第18-19页 |
| ·MRP1基因的转录调控 | 第19-21页 |
| ·转录因子SP1与MRP1基因 | 第19-20页 |
| ·PI3K/Akt信号通路与MRP1基因 | 第20-21页 |
| ·血管内皮细胞生长因子VEGF的概述 | 第21-24页 |
| ·VEGF的基本结构、表达和功能 | 第21-22页 |
| ·VEGF在恶性肿瘤中的表达和作用 | 第22-23页 |
| ·VEGF与肿瘤细胞MDR | 第23-24页 |
| ·本课题的着眼点和主要研究思路 | 第24-25页 |
| 第一部分 VEGF对肿瘤细胞多药耐药相关蛋白1表达的影响 | 第25-42页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·细菌培养基 | 第27页 |
| ·细胞株 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·细胞培养 | 第27页 |
| ·细胞总RNA抽提 | 第27-28页 |
| ·逆转录 | 第28页 |
| ·MRP1基因引物设计及合成 | 第28页 |
| ·PMD19T-MRP1基因重组质粒构建及标准品制备 | 第28-32页 |
| ·标准曲线的制备 | 第32-33页 |
| ·MX3000P定量PCR仪检测MRP1 mRNA表达 | 第33页 |
| ·Western blot法检测MRP1蛋白表达 | 第33-35页 |
| ·统计分析 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-40页 |
| ·重组质粒PMD19T-MRP1的酶切鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·qRT-PCR检测各组肿瘤细胞中MRP1 mRNA的表达量 | 第36-39页 |
| ·电泳检测PCR扩增产物 | 第39页 |
| ·Western blot法检测各组肿瘤细胞中MRP1蛋白的表达量 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 VEGF对胃癌细胞BGC-823 MRP1启动子活性的影响 | 第42-59页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·细胞株 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-49页 |
| ·细胞培养 | 第43页 |
| ·重组PGL3-Basic-MRP1w报告基因质粒的合成 | 第43-44页 |
| ·重组质粒PGL3-Basic-MRP1w的扩增 | 第44-45页 |
| ·质粒瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞 | 第45页 |
| ·MRP1启动子报告基因自身活性的测定 | 第45-46页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第45页 |
| ·β-gal活性测定 | 第45-46页 |
| ·VEGF对MRP1启动子活性的影响 | 第46页 |
| ·PI3K抑制剂对VEGF上调MRP1启动子活性作用的影响 | 第46页 |
| ·PI3K/AKT信号通路及SP1在VEGF上调MRP1蛋白表达中的作用 | 第46-48页 |
| ·Western blot法检测MRP1、Akt、P-Akt及SP1蛋白的表达 | 第46-47页 |
| ·EMSA法检测SP1转录活性 | 第47-48页 |
| ·重组PGL3-Basic-MRP1m报告基因质粒的合成 | 第48页 |
| ·质粒瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞 | 第48-49页 |
| ·SP1结合位点突变后MRP1启动子区活性的测定 | 第49页 |
| ·SP1结合位点突变后VEGF对MRP1启动子区活性的影响 | 第49页 |
| ·统计分析 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-57页 |
| ·重组质粒PGL3-Basic-MRP1w的酶切鉴定及DNA序列分析结果 | 第49-50页 |
| ·MRP1启动子活性的测定结果 | 第50-51页 |
| ·VEGF对MRP1启动子活性的影响 | 第51-52页 |
| ·PI3K抑制剂LY294002对VEGF作用下MRP1启动子活性的影响 | 第52-53页 |
| ·VEGF及PI3K抑制剂对MRP1蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| ·VEGF对Akt、p-Akt蛋白的表达的影响 | 第54页 |
| ·VEGF对转录因子SP1蛋白表达及活性的影响 | 第54-55页 |
| ·SP1结合位点突变后MRP1启动子活性的测定结果 | 第55-56页 |
| ·VEGF对SP1结合位点突变后MRP1启动子活性的影响 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 主要结论和展望 | 第59-60页 |
| ·主要结论 | 第59页 |
| ·展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 英文缩写索引 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第67页 |
