大肠杆菌对恩诺沙星耐药性研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 大肠杆菌耐药性现状 | 第11-13页 |
| 2 细菌耐药性机理研究进展 | 第13-16页 |
| ·抗菌药物作用靶位改变 | 第13-14页 |
| ·产生灭活酶 | 第14页 |
| ·改变细菌外膜通透性 | 第14-15页 |
| ·影响主动外排系统 | 第15页 |
| ·形成细菌生物膜 | 第15-16页 |
| ·细菌形态的变化 | 第16页 |
| 3 防突变浓度与突变选择窗理论 | 第16-18页 |
| ·MPC定义 | 第16-18页 |
| ·MSW与MIC理论的区别 | 第18页 |
| 4 外排泵抑制剂 | 第18-21页 |
| ·干扰外排泵组装的外排泵抑制剂 | 第19页 |
| ·阻断外排泵能量来源的外排泵抑制剂 | 第19-20页 |
| ·阻碍底物通过外排泵通道的外排泵抑制剂 | 第20页 |
| ·机制未知的外排泵抑制剂 | 第20-21页 |
| 5 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二部分 大肠杆菌的药敏试验 | 第23-34页 |
| 试验一 山东地区动物源大肠杆菌药敏检测 | 第24-30页 |
| 1 材料与方法 | 第24-26页 |
| ·试验材料 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌的分离鉴定 | 第25页 |
| ·药敏试验 | 第25-26页 |
| 2 结果与分析 | 第26-28页 |
| ·禽源大肠杆菌药敏检测结果 | 第26-27页 |
| ·猪源大肠杆菌药敏结果 | 第27-28页 |
| 3 讨论 | 第28-29页 |
| 4 小结 | 第29-30页 |
| 试验二 吸管药敏检测盒的研制 | 第30-34页 |
| 1 材料与方法 | 第30-32页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·制备检测盒 | 第30-31页 |
| ·检测盒的使用 | 第31-32页 |
| ·检测盒效果验证 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33页 |
| 4 小结 | 第33-34页 |
| 第三部分 大肠杆菌对恩诺沙星耐药机理研究 | 第34-71页 |
| 试验一 坡面平板法的建立 | 第35-43页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·制定标准曲线 | 第35-36页 |
| ·配制琼脂块 | 第36页 |
| ·配制坡面平板 | 第36页 |
| ·坡面平板各位置浓度分布与时间的关系 | 第36页 |
| ·测定扩散浓度与配制浓度之间的关系 | 第36-37页 |
| ·测定琼脂块中药物回收率 | 第37页 |
| ·坡面平板验证 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| ·标准曲线 | 第37页 |
| ·坡面平板表面药物浓度 | 第37-39页 |
| ·不同配制浓度坡面平板表面药物浓度 | 第39-41页 |
| ·琼脂中药物回收率 | 第41页 |
| ·坡面平板使用效果 | 第41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| 4 小结 | 第42-43页 |
| 试验二 坡面平板上大肠杆菌性质的研究 | 第43-47页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| ·试验材料 | 第43页 |
| ·配制坡面平板 | 第43页 |
| ·细菌处理 | 第43页 |
| ·扩增喹诺酮耐药决定区 | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-46页 |
| 3 讨论 | 第46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 试验三 恩诺沙星对大肠杆菌基因组表达谱的影响 | 第47-60页 |
| 1 材料与方法 | 第47-50页 |
| ·供试菌种 | 第47页 |
| ·表达谱基因芯片 | 第47页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第47-48页 |
| ·大肠杆菌生长曲线的测定与形态观察 | 第48页 |
| ·细菌总RNA提取 | 第48页 |
| ·样品RNA标记 | 第48页 |
| ·杂交与清洗 | 第48-49页 |
| ·芯片扫描与图像采集 | 第49页 |
| ·基因突变分析 | 第49-50页 |
| ·数据分析 | 第50页 |
| 2 结果 | 第50-56页 |
| ·大肠杆菌生长状态 | 第50-51页 |
| ·总RNA电泳鉴定 | 第51-52页 |
| ·表达谱基因芯片杂交与图像采集 | 第52页 |
| ·差异基因筛选 | 第52-56页 |
| ·基因序列比对结果 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-59页 |
| ·基因谱表达 | 第56-59页 |
| ·基因序列比对 | 第59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 试验四 荧光定量测定大肠杆菌基因表达量 | 第60-66页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| ·试验仪器 | 第60-61页 |
| ·细菌处理 | 第61页 |
| ·提取供试大肠杆菌总RNA | 第61页 |
| ·荧光定量PCR | 第61-62页 |
| ·结果处理 | 第62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-64页 |
| ·扩增曲线 | 第62-63页 |
| ·熔解曲线 | 第63页 |
| ·基因数量 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 试验五 外排泵与耐药性的关系 | 第66-71页 |
| 1 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·供试菌株 | 第66页 |
| ·试验器材 | 第66-67页 |
| ·试剂配制 | 第67页 |
| ·测定菌体内恩诺沙星达到稳态的时间 | 第67页 |
| ·外排泵检测 | 第67-68页 |
| 2 试验结果 | 第68-69页 |
| ·菌体内药物达到稳态所需时间 | 第68页 |
| ·细菌外排泵检测结果 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-70页 |
| 4 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
