| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 卵巢癌简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 卵巢癌概况 | 第13页 |
| 1.1.2 传统的卵巢癌治疗 | 第13页 |
| 1.1.3 卵巢癌的靶向治疗 | 第13-15页 |
| 1.2 OCT1简介 | 第15-19页 |
| 1.2.1 OCT1的研究起源 | 第15页 |
| 1.2.2 OCT1结构及其生理功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 OCT1在癌症中的作用及其机制 | 第16-19页 |
| 1.3 本课题的研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 OCT1与卵巢癌的相关性评估 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验样本及细胞株 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂及抗体 | 第21-23页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.2.1 试剂的配制 | 第24-26页 |
| 2.2.2 IHC检测人卵巢癌临床样本中OCT1的表达情况 | 第26-28页 |
| 2.2.3 Westernblot检测卵巢癌细胞系中OCT1的表达情况 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-31页 |
| 2.3.1 OCT1在人卵巢癌临床肿瘤样本中高表达 | 第29-30页 |
| 2.3.2 OCT1在卵巢癌细胞株SKOV3及HO8910中表达量较高 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第31-32页 |
| 第三章 siRNA敲减OCT1对卵巢癌细胞株的作用 | 第32-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验细胞株 | 第32页 |
| 3.1.2 实验试剂及抗体 | 第32-33页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 试剂的配制 | 第33页 |
| 3.2.2 siRNA逆转染 | 第33-34页 |
| 3.2.2.1 siRNA的序列设计及合成 | 第33-34页 |
| 3.2.2.2 siRNA逆转染实验 | 第34页 |
| 3.2.3 qRT-PCR检测siOCT1的敲减效果 | 第34-36页 |
| 3.2.4 Westernblot检测siOCT1的敲减效果 | 第36页 |
| 3.2.5 siRNA作用于OCT1后对卵巢癌细胞株的作用 | 第36-37页 |
| 3.2.5.1 MTT实验 | 第36页 |
| 3.2.5.2 细胞迁移实验 | 第36-37页 |
| 3.2.5.3 细胞侵润实验 | 第37页 |
| 3.2.6 Westernblot检测迁移侵润相关蛋白的变化 | 第37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 敲减OCT1在mRNA及蛋白水平的表达下调 | 第37-38页 |
| 3.3.2 敲减OCT1不影响卵巢癌细胞株的增殖能力 | 第38-39页 |
| 3.3.3 敲减OCT1可显著抑制卵巢癌细胞株的迁移侵润能力 | 第39-41页 |
| 3.3.4 敲减OCT1可引起ZO-1的上调和Fibronectin、ERK的下调 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第42-44页 |
| 第四章 OCT1过表达对卵巢癌细胞株的作用 | 第44-61页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 实验细胞株及菌株 | 第44页 |
| 4.1.2 实验试剂及抗体 | 第44-45页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-54页 |
| 4.2.1 试剂的配制 | 第45-47页 |
| 4.2.2 表达载体pCDH-EF1-MCS-OCT1-T2A-puro的构建 | 第47-52页 |
| 4.2.2.1 目的基因的PCR扩增引物设计 | 第47-48页 |
| 4.2.2.2 PCR扩增目的基因 | 第48-49页 |
| 4.2.2.3 PCR产物跑胶验证并胶回收 | 第49-50页 |
| 4.2.2.4 质粒酶切 | 第50页 |
| 4.2.2.5 载体回收 | 第50页 |
| 4.2.2.6 重组目的基因和载体片段 | 第50-51页 |
| 4.2.2.7 质粒转化及抽提 | 第51-52页 |
| 4.2.2.8 酶切验证 | 第52页 |
| 4.2.2.9 测序验证 | 第52页 |
| 4.2.3 慢病毒感染构建OCT1过表达的卵巢癌细胞系 | 第52-53页 |
| 4.2.3.1 制备OCT1过表达体系的慢病毒 | 第52-53页 |
| 4.2.3.2 慢病毒感染构建OCT1过表达的卵巢癌细胞株 | 第53页 |
| 4.2.4 qRT-PCR检测OCT1的过表达效果 | 第53页 |
| 4.2.5 Westernblot检测OCT1的过表达效果 | 第53页 |
| 4.2.6 过表达OCT1对卵巢癌细胞株的作用 | 第53页 |
| 4.2.6.1 MTT实验 | 第53页 |
| 4.2.6.2 细胞迁移实验 | 第53页 |
| 4.2.6.3 细胞侵润实验 | 第53页 |
| 4.2.7 Westernblot检测迁移侵润相关蛋白的变化 | 第53-54页 |
| 4.3 实验结果 | 第54-59页 |
| 4.3.1 酶切及测序验证OCT1过表达载体构建成功 | 第54-55页 |
| 4.3.2 OCT1在mRNA及蛋白水平的表达上调 | 第55-56页 |
| 4.3.3 OCT1过表达不影响卵巢癌细胞株的增殖能力 | 第56-57页 |
| 4.3.4 OCT1过表达可促进卵巢癌细胞株的迁移侵润能力 | 第57-58页 |
| 4.3.5 OCT1过表达可引起ZO-1的下调和Fibronectin的上调 | 第58-59页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第59-61页 |
| 第五章 shRNA慢病毒敲减OCT1对卵巢癌细胞株的作用 | 第61-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.1.1 实验细胞株及菌株 | 第61页 |
| 5.1.2 实验试剂及抗体 | 第61页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第61页 |
| 5.2 实验方法 | 第61-64页 |
| 5.2.1 试剂配制 | 第61页 |
| 5.2.2 shOCT1敲减载体的构建 | 第61-64页 |
| 5.2.2.1 shRNA序列设计及合成 | 第61-62页 |
| 5.2.2.2 shRNA退火 | 第62页 |
| 5.2.2.3 酶切载体胶回收 | 第62-63页 |
| 5.2.2.4 连接载体片段与shOCT1序列 | 第63-64页 |
| 5.2.2.5 质粒转化及抽提 | 第64页 |
| 5.2.2.6 酶切验证 | 第64页 |
| 5.2.2.7 测序验证 | 第64页 |
| 5.2.3 慢病毒感染构建shRNA敲减OCT1的卵巢癌细胞株 | 第64页 |
| 5.2.3.1 制备shRNA敲减OCT1的慢病毒 | 第64页 |
| 5.2.3.2 慢病毒感染构建shRNA敲减OCT1的卵巢癌细胞株 | 第64页 |
| 5.2.4 Westernblot检测shOCT1的敲减效果 | 第64页 |
| 5.2.5 shRNA敲减OCT1对卵巢癌细胞株的作用 | 第64页 |
| 5.2.5.1 MTT实验 | 第64页 |
| 5.2.5.2 细胞迁移实验 | 第64页 |
| 5.2.5.3 细胞侵润实验 | 第64页 |
| 5.3 实验结果 | 第64-68页 |
| 5.3.1 酶切及测序验证shOCT1载体构建成功 | 第64-66页 |
| 5.3.2 OCT1在蛋白水平表达下调 | 第66页 |
| 5.3.3 敲减OCT1不影响卵巢癌细胞株的增殖能力 | 第66-67页 |
| 5.3.4 敲减OCT1可抑制卵巢癌细胞株的迁移侵润能力 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第68-69页 |
| 第六章 敲减OCT1对SKOV3细胞在小鼠体内迁移侵润的影响 | 第69-77页 |
| 6.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 6.1.1 实验细胞株及小鼠品系 | 第69页 |
| 6.1.2 实验试剂及抗体 | 第69页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第69-70页 |
| 6.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 6.2.1 试剂的配制 | 第70页 |
| 6.2.2 建立卵巢癌细胞株小鼠肺转移模型 | 第70页 |
| 6.2.2.1 制备shOCT1敲减的SKOV3卵巢癌细胞株 | 第70页 |
| 6.2.2.2 建立shOCT1敲减的卵巢癌细胞株的小鼠肺转移模型 | 第70页 |
| 6.2.3 石蜡切片的制备和染色 | 第70-71页 |
| 6.2.3.1 石蜡切片的制备 | 第70-71页 |
| 6.2.3.2 HE染色 | 第71页 |
| 6.2.3.3 IHC染色 | 第71页 |
| 6.4 实验结果 | 第71-76页 |
| 6.4.1 实验前后小鼠的体重变化无明显差异 | 第71-72页 |
| 6.4.2 敲减OCT1抑制小鼠体内卵巢癌细胞SKOV3向肺迁移和侵润的能力 | 第72-73页 |
| 6.4.3 敲减OCT1不影响模型小鼠主要代谢脏器的重量 | 第73-74页 |
| 6.4.4 HE及IHC染色证明敲减OCT1抑制小鼠体内卵巢癌细胞SKOV3向肺迁移和侵润的能力 | 第74-76页 |
| 6.5 讨论与小结 | 第76-77页 |
| 第七章 总结与展望 | 第77-78页 |
| 7.1 工作总结 | 第77页 |
| 7.2 工作展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 在校期间参加课题和发表论文等情况 | 第84-86页 |
| 附录：中英文对照表 | 第86-87页 |
