| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1.1 HRV 3C蛋白酶简介 | 第14-15页 |
| 1.2 HRV 3C蛋白酶的结构 | 第15-16页 |
| 1.3 3C蛋白酶的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 小RNA病毒中的3C蛋白酶 | 第16-17页 |
| 1.3.2 3C蛋白酶的融合表达 | 第17-19页 |
| 1.3.3 抗小RNA病毒感染的药物——3C蛋白酶抑制剂 | 第19-20页 |
| 1.4 蛋白质的分离纯化方法 | 第20-22页 |
| 1.4.1 蛋白质的预处理 | 第20页 |
| 1.4.2 粗纯层析法 | 第20-21页 |
| 1.4.3 精纯层析法 | 第21-22页 |
| 1.5 论文主要内容及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 HRV3C蛋白酶表达载体的构建 | 第24-40页 |
| 2.1 前言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.3.1 人鼻病毒3C蛋白酶(HRV3C)的蛋白及基因序列 | 第27-28页 |
| 2.3.2 HRV3C表达载体构建 | 第28-32页 |
| 2.3.3 HRV3C菌种筛选表达 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果及分析 | 第33-39页 |
| 2.4.1 HRV 3C蛋白酶编码基因PCR扩增结果 | 第33-34页 |
| 2.4.2 乙醇沉淀HRV 3C PCR产物 | 第34页 |
| 2.4.3 琼脂糖凝胶回收酶切产物 | 第34-35页 |
| 2.4.4 连接产物转化平板 | 第35页 |
| 2.4.5 菌落PCR鉴定阳性克隆 | 第35-36页 |
| 2.4.6 测序验证 | 第36页 |
| 2.4.7 阳性克隆菌种的保存及质粒提取 | 第36页 |
| 2.4.8 表达载体的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.9 表达载体pKL1-3C转化E. coil表达宿主菌XA90 | 第37页 |
| 2.4.10 SDS-PAGE检测目的蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.4.11 表达工程菌原始种子的保存及测序验证 | 第38页 |
| 2.4.12 质粒及菌种信息汇总 | 第38-39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 HRV3C蛋白酶的表达纯化 | 第40-66页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.2 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 产3C蛋白酶菌株的发酵培养 | 第42-43页 |
| 3.3.2 羟基磷灰石(CHT)层析 | 第43-45页 |
| 3.3.3 离子交换层析 | 第45-46页 |
| 3.3.4 疏水层析 | 第46页 |
| 3.3.5 硫酸铵沉淀盐析 | 第46-47页 |
| 3.3.6 分子筛层析 | 第47页 |
| 3.3.7 3C蛋白酶中试放大纯化 | 第47-48页 |
| 3.3.8 3C蛋白酶活性检测 | 第48-49页 |
| 3.3.9 3C蛋白酶浓度检测(Bradford法) | 第49页 |
| 3.4 实验结果及分析 | 第49-64页 |
| 3.4.1 羟基磷灰石(CHT)层析实验结果 | 第49-54页 |
| 3.4.2 离子交换层实验结果 | 第54-55页 |
| 3.4.3 疏水层析实验结果 | 第55-57页 |
| 3.4.4 硫酸铵沉淀盐析实验结果 | 第57-58页 |
| 3.4.5 分子筛层析实验结果 | 第58-60页 |
| 3.4.6 中试放大试验结果 | 第60-64页 |
| 3.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 4.1 结论 | 第66-67页 |
| 4.2 展望、建议 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 研究成果及发表的论文 | 第74-76页 |
| 作者和导师简介 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77-78页 |
