| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第13-18页 |
| 1.1 植物中的氮素营养 | 第13页 |
| 1.2 杨树和氮素营养 | 第13-14页 |
| 1.3 植物对氮素的吸收和同化 | 第14-15页 |
| 1.4 Dof转录因子的结构和功能 | 第15页 |
| 1.5 Dof转录因子与氮素的吸收和利用 | 第15-16页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第16-18页 |
| 2 毛果杨Dof转录因子基因家族成员鉴定和功能分析 | 第18-30页 |
| 2.1 材料和方法 | 第18-19页 |
| 2.1.1 毛果杨Dof转录因子家族成员的鉴定和理化性质分析 | 第18页 |
| 2.1.2 基因结构和染色体定位 | 第18页 |
| 2.1.3 蛋白质多重比对和系统进化分析 | 第18页 |
| 2.1.4 保守基序鉴定 | 第18页 |
| 2.1.5 进化选择压力分析 | 第18页 |
| 2.1.6 毛果杨Dof基因表达模式分析 | 第18-19页 |
| 2.2 实验结果 | 第19-28页 |
| 2.2.1 毛果杨中Dof转录因子家族成员的鉴定 | 第19-20页 |
| 2.2.2 毛果杨中Dof家族成员之间的系统进化关系和基因结构 | 第20-22页 |
| 2.2.3 毛果杨Dof家族成员蛋白质保守基序分析 | 第22-24页 |
| 2.2.4 进化压力分析 | 第24-25页 |
| 2.2.5 毛果杨Dof基因家族成员染色体定位 | 第25-26页 |
| 2.2.6 毛果杨Dof基因在efp数据库和Phytozome数据库中的表达模式分析 | 第26-28页 |
| 2.3 本章小结 | 第28-30页 |
| 3 小黑杨中响应氮素的Dof基因的筛选 | 第30-36页 |
| 3.1 材料 | 第30页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验试剂配制 | 第30页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 小黑杨生长氮素处理 | 第30页 |
| 3.2.2 小黑杨氮素处理样品RNA提取 | 第30-31页 |
| 3.2.3 小黑杨氮素处理样品cDNA的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.4 SYBR Green实时荧光定量PCR | 第32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-35页 |
| 3.3.1 硝酸铵处理下杨树Dof基因在不同组织部位的表达模式分析 | 第32-33页 |
| 3.3.2 硝态氮和铵态氮处理下杨树Dof基因在不同组织部位的表达模式分析 | 第33-35页 |
| 3.4 本章小结 | 第35-36页 |
| 4 小黑杨PnDof19、PnDof20和PnDof30基因的克隆 | 第36-46页 |
| 4.1 材料 | 第36页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 4.1.2 载体和菌株 | 第36页 |
| 4.1.3 主要试剂和培养基的配制 | 第36页 |
| 4.1.4 试验仪器 | 第36页 |
| 4.1.5 引物合成与测序 | 第36页 |
| 4.2 方法 | 第36-40页 |
| 4.2.1 小黑杨总RNA的提取和cDNA制备 | 第36-37页 |
| 4.2.2 PnDof19、PnDof20和PnDof30基因编码序列全长的克隆 | 第37页 |
| 4.2.3 PnDof19、PnDof20和PnDof30基因PCR产物的回收与纯化 | 第37-38页 |
| 4.2.4 PnDof19、PnDof20和PnDof30基因PCR产物与pEasy载体的连接 | 第38页 |
| 4.2.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第38页 |
| 4.2.6 菌液PCR检测以及质粒的提取和验证 | 第38-39页 |
| 4.2.7 PnDof19、PnDof20、PnDof30克隆序列分析 | 第39页 |
| 4.2.8 蛋白质多重比对和系统进化分析 | 第39-40页 |
| 4.3 实验结果 | 第40-45页 |
| 4.3.1 小黑杨总RNA的提取和质量检测 | 第40页 |
| 4.3.2 小黑杨PnDof19、PnDof20和PnDof30基因的克隆 | 第40-41页 |
| 4.3.3 小黑杨PnDof19、PnDof20和PnDof30基因CDS序列分析 | 第41-42页 |
| 4.3.4 蛋白质结构预测 | 第42-43页 |
| 4.3.5 蛋白质多重比对分析 | 第43-44页 |
| 4.3.6 系统进化分析 | 第44-45页 |
| 4.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 5 小黑杨PnDof19、PnDof20和PnDo30蛋白亚细胞定位 | 第46-51页 |
| 5.1 材料 | 第46页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 5.1.2 菌株和载体 | 第46页 |
| 5.1.3 实验主要试剂和仪器 | 第46页 |
| 5.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 5.2.1 pBS-PnDof19-GFP、pBS-PnDof20-GFP和pBS-PnDof30-GFP载体构建 | 第46-47页 |
| 5.2.2 pBS质粒和pEasy-PnDof19、pEasy-PnDof20和pEasy-PnDof30质粒PCR产物双酶切 | 第47-48页 |
| 5.2.3 pBS-GFP载体与PnDof19、PnDof20和PnDof30基因双酶切产物的连接与转化 | 第48页 |
| 5.2.4 含重组载体菌液PCR检测及测序 | 第48页 |
| 5.2.5 基因枪轰击法PnDof19、PnDo20和PnDof30蛋白亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 5.3 实验结果 | 第49-50页 |
| 5.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 6 过表达PnDof30基因的拟南芥转化株系表型分析 | 第51-65页 |
| 6.1 材料 | 第51-52页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 6.1.2 载体和菌种 | 第51页 |
| 6.1.3 培养基和营养液 | 第51-52页 |
| 6.1.4 试验所用试剂 | 第52页 |
| 6.1.5 试验所用仪器 | 第52页 |
| 6.2 方法 | 第52-56页 |
| 6.2.1 pROK2-PnDof30植物表达载体构建以及农杆菌转化 | 第52-53页 |
| 6.2.2 农杆菌感受态的制备以及电激法转化 | 第53-54页 |
| 6.2.3 拟南芥的种植 | 第54页 |
| 6.2.4 农杆菌介导pROK2-PnDof30重组载体遗传转化 | 第54-55页 |
| 6.2.5 纯合株系的筛选 | 第55页 |
| 6.2.6 拟南芥转PnDof30株系的鉴定 | 第55页 |
| 6.2.7 拟南芥转PnDof30株系的功能鉴定 | 第55-56页 |
| 6.3 实验结果 | 第56-63页 |
| 6.3.1 植物表达载体的构建 | 第56-57页 |
| 6.3.2 拟南芥遗传转化和纯合株系筛选 | 第57-58页 |
| 6.3.3 拟南芥转化株系氮素处理实验 | 第58-59页 |
| 6.3.4 拟南芥过表达PnDof30基因株系生理表型和酶活分析 | 第59-61页 |
| 6.3.5 拟南芥过表达PnDof30基因株系C/N代谢途径中关键基因的表达分析 | 第61-63页 |
| 6.4 本章小结 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
