| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 乙酰转移酶概论 | 第10-14页 |
| 1.1.1 乙酰转移酶简述 | 第10页 |
| 1.1.2 增强胞内存活蛋白 | 第10-13页 |
| 1.1.3 芳烷胺乙酰转移酶概述 | 第13-14页 |
| 1.2 氨基糖苷类抗生素概论 | 第14-18页 |
| 1.2.1 氨基糖苷类抗生素背景介绍 | 第14-16页 |
| 1.2.2 氨基糖苷类抗生素的耐药性修饰 | 第16-18页 |
| 1.3 生物胺概论 | 第18-20页 |
| 1.3.1 生物胺的产生及毒性 | 第18-19页 |
| 1.3.2 生物胺的检测方法 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第2章 增强胞内存活蛋白乙酰化活性差异 | 第22-43页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌种、质粒及基因 | 第22-23页 |
| 2.2.2 药品与试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.2.4 培养基和溶液 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 获取eis基因 | 第24-26页 |
| 2.3.2 pET-28(+)质粒的抽提 | 第26-27页 |
| 2.3.3 基因和载体的酶切及连接 | 第27-28页 |
| 2.3.4 基因工程菌的获取 | 第28-29页 |
| 2.3.5 Eis蛋白的诱导表达纯化 | 第29页 |
| 2.3.6 Eis结构域拆分表达系统构建 | 第29-30页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第30-41页 |
| 2.4.1 47种细菌中Eis蛋白同源性分析 | 第30-34页 |
| 2.4.2 Eis蛋白的获取 | 第34-35页 |
| 2.4.3 Seneis/Msmeis/Mtbeis pET-28a(+)/BL21 (DE3)的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.4 SenEis/MsmEis/MtbEis SCP2结构域拆分 | 第36-38页 |
| 2.4.5 SenEis乙酰化特性研究 | 第38-40页 |
| 2.4.6 SenEis/MsmEis/MtbEis (△SCP2)乙酰化特性研究 | 第40-41页 |
| 2.5 讨论及结论 | 第41-43页 |
| 2.5.1 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5.2 结论 | 第42-43页 |
| 第3章 脂肪酸结合SCP2别构调控Eis酶活 | 第43-69页 |
| 3.1 引言 | 第43-44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-49页 |
| 3.2.1 试剂 | 第44-45页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第45页 |
| 3.2.3 溶液配制 | 第45-46页 |
| 3.2.4 引物设计 | 第46-49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-55页 |
| 3.3.1 YFP-CFP荧光传感器的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.2 基于SCP2结构元件FRET传感器构建 | 第50-51页 |
| 3.3.3 传感器对调控信号分子的筛选 | 第51-52页 |
| 3.3.4 点突变 | 第52页 |
| 3.3.5 脂肪酸对Eis活性调控分析 | 第52-54页 |
| 3.3.6 Western blotting | 第54-55页 |
| 3.4 实验结果 | 第55-67页 |
| 3.4.1 小分子介导Eis构象变化 | 第55-58页 |
| 3.4.2 信号分子结合区域的定位 | 第58-59页 |
| 3.4.3 油酸调控Eis乙酰化AGs活性 | 第59-61页 |
| 3.4.4 油酸调控SenEis乙酰化Acs活性 | 第61-63页 |
| 3.4.5 油酸结合位点分析 | 第63-67页 |
| 3.5 讨论及结论 | 第67-69页 |
| 3.5.1 讨论 | 第67页 |
| 3.5.2 结论 | 第67-69页 |
| 第4章 aaNAT乙酰化氨基生物小分子的应用 | 第69-79页 |
| 4.1 引言 | 第69页 |
| 4.2 实验原理 | 第69-70页 |
| 4.3 实验材料 | 第70-71页 |
| 4.3.1 试剂 | 第70-71页 |
| 4.3.2 实验仪器 | 第71页 |
| 4.3.3 溶液配制 | 第71页 |
| 4.4 实验方法 | 第71-72页 |
| 4.4.1 aanat基因的优化 | 第71页 |
| 4.4.2 aaNAT蛋白的表达 | 第71-72页 |
| 4.4.3 aaNAT对生物胺的检测 | 第72页 |
| 4.4.4 实样添加检测 | 第72页 |
| 4.5 实验结果与分析 | 第72-78页 |
| 4.5.1 基因的优化 | 第72-73页 |
| 4.5.2 灵敏度实验 | 第73-76页 |
| 4.5.3 aaNAT-DTNB比色检测选择性实验 | 第76页 |
| 4.5.4 实际样品检测分析 | 第76-78页 |
| 4.6 小结 | 第78-79页 |
| 第5章 总结与展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
