中文摘要 | 第4-8页 |
abstract | 第8-11页 |
引言 | 第14-26页 |
1.1 概述 | 第14-18页 |
1.2 实验技术路线图 | 第18-21页 |
1.3 实验方法 | 第21-26页 |
1.3.1 qRT-PCR法 | 第21页 |
1.3.2 免疫印迹法 | 第21-22页 |
1.3.3 细胞转染 | 第22页 |
1.3.4 流式细胞仪实验 | 第22-23页 |
1.3.5 Transwell实验 | 第23页 |
1.3.6 萤光素酶技术 | 第23-24页 |
1.3.7 AV/PI双染色法 | 第24页 |
1.3.8 SRB法 | 第24-26页 |
第一部分 ZFAS1、MIR-150在肺癌中差异表达及相关分析 | 第26-40页 |
一、引言 | 第26-27页 |
二、材料与方法 | 第27-34页 |
1.病例收集和组织样本 | 第27页 |
2.主要设备与试剂 | 第27-28页 |
3.qRT-PCR | 第28-34页 |
4.统计学分析 | 第34页 |
三、结果 | 第34-36页 |
四、讨论 | 第36-38页 |
五、小结 | 第38-40页 |
第二部分 MIR-150、ZEB1对肺癌细胞功能的影响 | 第40-59页 |
一、引言 | 第40-41页 |
二、材料与方法 | 第41-48页 |
1.细胞系及转染质粒 | 第41页 |
2.主要设备与试剂 | 第41-42页 |
3.mimics、inhibitors设计合成及转染 | 第42-43页 |
4.慢病毒质粒构建、包装、感染 | 第43-45页 |
5.SRB法检测肿瘤细胞增殖 | 第45页 |
6.流式细胞仪测细胞凋亡-AV/PI双染色法 | 第45-46页 |
7.细胞周期检测 | 第46-47页 |
8.细胞划痕实验和Transwell实验检测肿瘤细胞侵袭和迁移能力 | 第47-48页 |
9.CCK-8实验 | 第48页 |
10.统计学分析 | 第48页 |
三、结果 | 第48-53页 |
3.1 敲降及过表达miR-150对细胞增殖的影响 | 第48-49页 |
3.2 敲降及过表达miR-150对细胞周期、凋亡影响 | 第49-50页 |
3.3 敲降及过表达miR-150对细胞侵袭能力影响 | 第50-51页 |
3.4 敲降及过表达miR-150对细胞迁移能力影响 | 第51页 |
3.5 同时过表达miR-150和ZEB1对细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
3.6 同时过表达miR-150和ZEB1对细胞周期、凋亡影响 | 第52-53页 |
四、讨论 | 第53-56页 |
五、小结 | 第56-59页 |
第三部分 MIR-150靶基因预测与分析 | 第59-71页 |
一、引言 | 第59-60页 |
二、材料与方法 | 第60-66页 |
1.动物及细胞系 | 第60页 |
2.主要设备与试剂 | 第60-62页 |
3.mimics、inhibitors设计合成及转染 | 第62-63页 |
4.慢病毒质粒构建、包装、感染 | 第63-64页 |
5.Western-blot测定蛋白表达 | 第64页 |
6.萤光素酶报告实验 | 第64-66页 |
7.统计学分析 | 第66页 |
三、结果 | 第66-69页 |
3.1 同时过表达miR-150和ZEB1对细胞成瘤的影响 | 第66-67页 |
3.2 miR-150相关特异靶基因ZEB1预测及验证 | 第67-69页 |
四、讨论 | 第69-70页 |
五、小结 | 第70-71页 |
结论与展望 | 第71-73页 |
结论 | 第71-72页 |
展望 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-81页 |
综述 | 第81-96页 |
参考文献 | 第91-96页 |
攻读临床博士期间发表文章一览表 | 第96-97页 |
英文缩略词表 | 第97-98页 |
致谢 | 第98-99页 |